培養(yǎng)基的實驗室制備:―般要求:正確制備培養(yǎng)基是微生物檢驗的好基礎(chǔ)步驟之一,使用脫水培養(yǎng)基和其他成分,尤其是含有有毒物質(zhì)(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應遵守良好實驗室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說明。培養(yǎng)基的不正確制備會導致培養(yǎng)基出現(xiàn)質(zhì)量問題。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配制。如重量(體積)、pH制備日期、滅菌條件和操作步驟等。實驗室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時,應按照配方準確配制,并記錄相關(guān)信息,如:培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質(zhì)含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便溯源。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性。中國香港培養(yǎng)基制備器
血清培養(yǎng)基主要問題:血清含一些對細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌有毒的等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。動物個體不同,血清產(chǎn)地、批號不同,每批質(zhì)量差異甚大,其成分不能保持一致。取材中可能帶入支原體、病毒,對細胞產(chǎn)生潛在影響,可能導致實驗失敗或?qū)嶒灲Y(jié)果不可靠性。大規(guī)模生產(chǎn)中,血清來源越來越困難,價格昂貴,是構(gòu)成動物細胞培養(yǎng)對生產(chǎn)成本的主要部分之一。北京進口培養(yǎng)基制備器使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。
制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基:培養(yǎng)基滅菌后,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時進行。(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實驗臺上放1支長0.5-1米左右的木條,厚度為1厘米左右,將試管頭部枕在木條上,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基。(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實驗臺上,點燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養(yǎng)皿蓋,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,待培養(yǎng)基凝固后,再5個培養(yǎng)皿一疊,倒置過來,平放在恒溫箱里,24小時后檢查,如培養(yǎng)基末長雜菌,即可用來培養(yǎng)微生物。
微生物培養(yǎng)基:根據(jù)微生物類型和培養(yǎng)基的組成,微生物培養(yǎng)基通??梢苑譃椋合薅ㄅ囵B(yǎng)基、復雜培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和富集培養(yǎng)基。在確定的培養(yǎng)基中,確切的化學成分是已知的。這些類型的培養(yǎng)基通常由純生化物質(zhì)組成,通常用于研究微生物的較低營養(yǎng)需求。相比之下,復雜介質(zhì)的確切化學成分尚不清楚。復雜介質(zhì)培養(yǎng)基類型通常包含生物來源的試劑,例如酵母提取物和蛋白胨,其中確切的化學成分未知。復雜培養(yǎng)基通常提供多種生長因子,有助于未知和挑剔的細菌物種的培養(yǎng)。培養(yǎng)基制備器利用與外部水連接的盤狀熱交換器,能夠使內(nèi)部迅速冷卻。
一種培養(yǎng)基制備分裝一體機,其中所述自動分裝系統(tǒng)包括一圓形轉(zhuǎn)盤,所述圓形轉(zhuǎn)盤上設(shè)有多個沿圓周方向均勻間隔設(shè)置的凹槽,所述凹槽內(nèi)設(shè)有培養(yǎng)皿,所述圓形轉(zhuǎn)盤上方還設(shè)有隨該圓形轉(zhuǎn)盤一起轉(zhuǎn)動的玻璃護蓋,所述出料管的出口段定位于所述玻璃護蓋與所述培養(yǎng)皿之間,出料管的出口與培養(yǎng)皿對應。地,上述的一種培養(yǎng)基制備分裝一體機,其中所述加熱元件為電熱管,該電熱管內(nèi)設(shè)有電熱絲。地,上述的一種培養(yǎng)基制備分裝一體機,其中所述加熱元件為電熱膜,該電熱膜由內(nèi)向外依次包括覆蓋連接于所述容腔底部壁體上的內(nèi)絕緣層,厚膜電路層和外絕緣層。培養(yǎng)基制備器全自動控制程序,確保內(nèi)部溫度均一。北京進口培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器殺菌劑可從此口加入,也可用注射器從硅酮膜注入。中國香港培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、病菌及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進行驗證。實際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產(chǎn)前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。另外,應將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴格分開,并有各自自立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對無毒區(qū)應保持相對負壓,防止病毒對培養(yǎng)細胞(尤其是細胞庫)的污染。中國香港培養(yǎng)基制備器