微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基制備的要點(diǎn):培養(yǎng)基溶化,將中海培養(yǎng)基納入燒杯容器中,加小適量的水,緩慢加水并用玻璃棒小幅度攪拌。倘若培養(yǎng)基中不含瓊脂,則不需要對(duì)培養(yǎng)基加熱;相反含有瓊脂,就需要用本生燈/電磁爐加熱煮沸。待培養(yǎng)基完全溶解后再加入適量的水?dāng)嚢杈鶆?。如?zhǔn)備的北京中海培養(yǎng)基較多,在不銹鋼鍋中融化加熱,可以用溫水加熱,需不停攪拌,防止焦化。如果不小心出現(xiàn)焦化現(xiàn)象,則制備好的培養(yǎng)基將無(wú)法使用,必須重新配制中海生物培養(yǎng)基。不要使用銅或鐵容器溶解制備培養(yǎng)基,因?yàn)殂~或鐵容器可能會(huì)導(dǎo)致容器內(nèi)培養(yǎng)基中銅、鐵超標(biāo),影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,其中培養(yǎng)基中銅含量大于0.3毫克每升,細(xì)菌不適宜生長(zhǎng)。鐵含量超過(guò)0.14毫克每升,防止細(xì)菌產(chǎn)生有毒的。容易發(fā)生反應(yīng)和沉淀的藥物應(yīng)單獨(dú)溶解,然后加入培養(yǎng)基中,如磷酸氫二鉀和硫酸鎂。天然培養(yǎng)基是指一類(lèi)利用動(dòng)物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。山東自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的安全分裝:無(wú)菌補(bǔ)料:通過(guò)分裝口可以定量添加無(wú)菌添加劑。大尺寸的分裝口帶有安全鎖。通過(guò)使用一個(gè)瓶子將添加劑添加到分裝開(kāi)口或通過(guò)一個(gè)septum膜,使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無(wú)菌添加。無(wú)菌分裝:培養(yǎng)基制備器的分裝口可以在分裝的時(shí)候打開(kāi),用于無(wú)菌分裝培養(yǎng)基。硅膠管是使用分裝接頭連接到分裝口。為了確保培養(yǎng)基的無(wú)菌分裝,硅膠管和分裝接頭必須提前在滅菌器中滅菌。培養(yǎng)基可以通過(guò)集成的空壓機(jī)產(chǎn)生的無(wú)菌空氣壓力分裝或通過(guò)連接到常見(jiàn)的蠕動(dòng)泵或其他集成成泵的裝置,來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)基的分裝。分裝選項(xiàng):制備和滅菌過(guò)的培養(yǎng)基可以通過(guò)一個(gè)軟管進(jìn)行分裝。在每次滅菌進(jìn)程中,內(nèi)吸管和分裝口也通過(guò)進(jìn)入的蒸汽進(jìn)行了滅菌。分裝軟管和連接到該軟管的分裝接頭必須使用合適的蒸汽滅菌工藝預(yù)先滅菌,并且必須在無(wú)菌條件下連接到分裝口。海南實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器固體培養(yǎng)基,一類(lèi)配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。
培養(yǎng)基制備器-培養(yǎng)基使用規(guī)程:1.目的:規(guī)范本中心微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基的使用和管理。2.適用范圍,本規(guī)程適用于培養(yǎng)基的儲(chǔ)存、融化和廢棄等。3.職責(zé),3.1檢驗(yàn)人員:按照本規(guī)程規(guī)范使用培養(yǎng)基、定期檢查培養(yǎng)基是否失效。3.2科室負(fù)責(zé)人:負(fù)責(zé)指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗(yàn)人員規(guī)范使用培養(yǎng)基。4.使用程序,4.1培養(yǎng)基的儲(chǔ)存,4.1.1除特殊說(shuō)明和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,通常情況下基礎(chǔ)培養(yǎng)基(如營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基)應(yīng)在4℃冰箱中保存不超過(guò)3個(gè)月,或在室溫(20℃)下保存不超過(guò)一個(gè)月。
培養(yǎng)基配置原則:選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),總體而言,所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水及能源,但由于微生物營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型復(fù)雜,不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的,因此首先要根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物合成自身需要的糖類(lèi)、脂類(lèi)、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物,因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以(或應(yīng)該)由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成。在該培養(yǎng)基配制過(guò)程中并未專(zhuān)門(mén)加入其他碳源物質(zhì),而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。就微生物主要類(lèi)型而言,有細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌、原生動(dòng)物、藻類(lèi)及病毒之分,培養(yǎng)它們所需的培養(yǎng)基各不相同。在實(shí)驗(yàn)室中常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(或簡(jiǎn)稱(chēng)普通肉湯培養(yǎng)基)培養(yǎng)細(xì)菌,用高氏I號(hào)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)放線菌,培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基,培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。配制培養(yǎng)基的原則:根據(jù)培養(yǎng)目的需要選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基的對(duì)應(yīng)詞,是微生物或動(dòng)植物細(xì)胞的液狀培養(yǎng)基。它具有進(jìn)行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)。在靜止的條件下,在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周?chē)?,形成透過(guò)養(yǎng)分的壁障,養(yǎng)分的攝入受到阻礙。由于在通氣或在振蕩的條件下,可消除這種阻礙以及增加供氧量,所以有利于細(xì)胞生長(zhǎng),提高生產(chǎn)量。培養(yǎng)基的配制:配料:配方換算→在容器中加入少量水→按照配方稱(chēng)取各種藥品,依次加入→加足所需水量一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋。溶解:淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95~97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。調(diào)PH:用1N的鹽酸或的1NNaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。過(guò)濾:濾紙或棉花進(jìn)行過(guò)濾。培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:正確制備培養(yǎng)基時(shí)微生物檢驗(yàn)的較基礎(chǔ)步驟之一。自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器品牌
培養(yǎng)基制備器注意不要過(guò)度干燥。商品化的平板瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)按照廠商提供的說(shuō)明使用。山東自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器
在制備培養(yǎng)基時(shí),通常要考慮以下因素:1.緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對(duì)培養(yǎng)物有營(yíng)養(yǎng)作用,因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。2.滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點(diǎn)降低或蒸汽壓升高測(cè)定。如果自己配培養(yǎng)基,可通過(guò)測(cè)定滲透壓防止3.粘度培養(yǎng)基的粘度主要受血清含量的影響,在多數(shù)情況下,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有什么影響。在攪拌條件下,用羧甲基纖維素增加培養(yǎng)基的粘度,可減輕細(xì)胞損害。這對(duì)在低血清濃度或無(wú)血清下條件下培養(yǎng)細(xì)胞顯得尤為重要。山東自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器