廣西EDTA胰酶常見問題

品名：0.25%胰蛋白酶溶液，1X分類：細胞消化試劑規(guī)格：100ML用途：消化試劑，如胰蛋白酶，被用于將粘附細胞從其附著的表面或底物上分離和降解，以及將組織進行游離，以開展原代細胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶（1：250）以及一種新型非哺乳動物豬胰蛋白酶替代品，稱為ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液，可以快速消化，同時不損傷細胞。其非哺乳動物配方使它適用于無血清應用，不需要失效或?qū)γ敢种苿４嗽噭┛墒辜毎豢焖俜蛛x，形成單細胞懸浮物，保持高細胞活力，并使傳代時的變異減至**小。胰酶PH值6.8左右時呈淡黃色。廣西EDTA胰酶常見問題

1、細胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時，細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。圖1.胰酶酶切位點2、使用胎牛血清培養(yǎng)細胞，在使用胰酶消化時發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程，這是什么原因？血清終止的原理其實是競爭抑制，就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合，使胰酶失去消化細胞蛋白的機會。3、為什么使用了胰蛋白酶消化，細胞還是成團的，這可能是什么原因?qū)е碌?？①消化時間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細胞密度過高之后才消化傳代⑤胰酶存儲不當，或者使用了過期胰酶山東進口胰酶常見問題胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸。

對一般細胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對難消化的細胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡合Ca2，增加消化效力

胰酶分裝凍存時要注意什么？胰酶分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復凍融會降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全？注意：不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動就可以了，就應該停止消化。6、胰酶適用于哪些細胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。胰酶和胰蛋白酶不一樣，前者包括后者。

胰蛋白酶**初在牛的胰腺中被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在已經(jīng)擴展到多種來源，包括哺乳動物（人、牛、豬和狗）、無脊椎動物和微生物等。胰蛋白酶的商業(yè)化生產(chǎn)主要依賴哺乳動物的胰腺組織提取或者重組表達提取。直接從哺乳動物胰腺組織中提取的缺點是生產(chǎn)成本高，易造成其他結(jié)構(gòu)相近的蛋白污染。重組表達提取胰蛋白酶可以縮短提取時間、降低生產(chǎn)成本，提取的蛋白純度高，通過優(yōu)化重組表達體系可以提高蛋白的表達量，這些優(yōu)勢為其在醫(yī)療、食品等行業(yè)中的應用提供了更多的可能性。[1]折疊胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換。新疆國產(chǎn)胰酶價格查詢

胰酶細胞消化液和胰蛋白酶消化液是一樣的嗎？廣西EDTA胰酶常見問題

    胰蛋白酶用法用量1.每次～5mg，用蒸餾水5～10ml溶解。2.一般應用：1次5000單位，每日1次肌注，用量酌情而定。為防止疼痛，可加適量普魯卡因。局部用*視情而定，可配成溶液制劑（～，微堿性時活性**強）、噴霧劑、粉劑、油膏等，用作體腔內(nèi)注射、患部注射、噴霧、濕敷、涂搽等。3.治蛇毒：取注射用結(jié)晶胰蛋白酶2000單位1～3支，加～（或注射用水）4～20ml稀釋，以牙痕為中心，在傷口周圍作浸潤注射，或在腫脹部位上方作環(huán)狀封閉1～2次。如病情需要可重復使用。若傷肢腫脹明顯，可于注射本品30分鐘后，切開傷口排毒減壓（嚴重出血者例外），也可在腫脹部位針刺排毒。如傷口已壞死、潰爛，可用其***胰蛋白酶注意事項1.不可作靜注。用前需作劃痕試驗，應注意可能產(chǎn)生過敏反應。2.吸取注射液后應另換針頭，以免注射時疼痛。3.外用時，可采用注射用制劑以緩沖液溶解，但必須在3小時內(nèi)用畢。胰蛋白酶不良反應：1．注射局部疼痛、硬結(jié)。2．本品可引起組胺釋放，產(chǎn)生全身反應，有寒戰(zhàn)、發(fā)熱、***、頭暈、胸痛、***、皮疹、血管神經(jīng)性水腫、呼吸困難、眼壓升高、白細胞減少等。癥狀輕時不影響繼續(xù)***，給予抗組胺*和對癥*物即可控制，嚴重時應即停*。3．本品偶可致過敏性休克。廣西EDTA胰酶常見問題