中國臺灣胰酶常見問題

    胰蛋白酶**點評胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀，易于引流排痰，加速創(chuàng)面愈合凈化，促進肉芽**增生，而不損傷正常**，臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細胞培養(yǎng)胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的**或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在pH為、溫度為37℃時，胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶**劑終止胰酶對細胞的作用。1.稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為%，用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調PH到左右）或PBS（D-hanks）液中。攪拌混勻，置于4℃內過夜。2.用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器（微米微孔濾膜）抽濾**。3.分裝成小瓶于-20℃保存以備使用可！詞條圖冊更多圖冊參考資料1.胰蛋白酶．化學品數(shù)據(jù)庫[引用日期2017-05-26].***典**會，***典2010版[M]，北京：**醫(yī)*科技出版社。EDTA是一種化學螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細胞分離。中國臺灣胰酶常見問題

對一般細胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內用完tip:低速很重要，機械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對難消化的細胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡合Ca2，增加消化效力廣東胰酶哪個好胰酶PH值6.8左右時呈淡黃色。

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說，盡量不要用水來溶，因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細胞消化的難易程度自己調整。EDTA并不是必須的，容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重。如果影響貼壁，但消化時必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解，在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時調整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾除菌。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時間和濾器，用的時候對上滅菌PBS即可。8、儲存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴，因為這樣會讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會，因為加的量很少，所以一般不會凍壞細胞。9、消化時。

    胰蛋白酶：（Trypsin）為蛋白酶的一種，是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計算，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在pH為、溫度為37℃時，胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。終止消化時，可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對細胞的作用。有些細胞容易消化（如雞胚原代成纖維細胞）可用胰酶進行消化，可以不加EDTA。 胰蛋白酶溶液作為細胞分離試劑廣泛應用于貼壁細胞的連續(xù)培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:1.研究的對象是活細胞在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。4.研究內容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。胰酶在細胞培養(yǎng)中的作用和在消化酶中的作用？青海重組胰酶供應商

變色的胰酶同樣能很好的用于細胞的解離，請放心使用。中國臺灣胰酶常見問題

胰酶細胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2＋和Mg2＋。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細胞消化液具有方便快速的特點,通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。使用說明：貼壁細胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細胞消化液（含酚紅）,略蓋過細胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來；此時吸除胰酶細胞消化液；加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。中國臺灣胰酶常見問題