湖南重組胰酶是什么

    收藏查看我的收藏0有用+1已投票0胰蛋白酶編輯鎖定本詞條由“科普**”百科科學(xué)詞條編寫與應(yīng)用工作項目審核。胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)為蛋白酶的一種，EC，是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中，作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后，作為胰液的成分而分泌，受腸激酶，或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶，是肽鏈內(nèi)切酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用，而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體，起活化作用。是特異性**強(qiáng)的蛋白酶，在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中，它成為不可缺少的工具。中文名胰蛋白酶英文名Trypsin別稱胰酶化學(xué)式C6H15O12P3分子量≈24000CAS登錄號9002-07-7EINECS登錄號232-650-8[1]熔點115℃[1]水溶性易溶外觀白色或類白色目錄1生物制品簡介?物化性質(zhì)2*典標(biāo)準(zhǔn)?來源含量?制法要求?性狀?鑒別?檢查?效價測定?制劑3胰蛋白酶的醫(yī)學(xué)檢查?檢查名稱?分類?胰蛋白酶的測定原理?試劑?操作方法?正常值?化驗結(jié)果臨床意義?附注?相關(guān)疾病4生物*品說明?*理作用?適應(yīng)證?禁忌證?用法用量?注意事項?不良反應(yīng)：?**點評5其他。在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。湖南重組胰酶是什么

    胰酶消化液(TrypsinSolution)操作步驟(一)獲得目的基因1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA***鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體1、胰酶消化液(TrypsinSolution)載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。(三)獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種1、將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。2、測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。3、以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。(四)誘導(dǎo)表達(dá)1、胰酶消化液(TrypsinSolution)挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2mlLB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。2、按1∶50比例稀釋過夜菌。 湖南重組胰酶是什么胰蛋白酶水解或胰蛋白酶化是蛋白質(zhì)被胰蛋白酶消化或處理的過程，因此被稱為胰蛋白酶化。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:1.研究的對象是活細(xì)胞在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

    胰酶使用注意：1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被**污染。2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差。貼壁細(xì)胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液，略蓋過細(xì)胞即可，根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘（不同的細(xì)胞消化時間有所不同）3、顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。4、此時吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實驗。常用的細(xì)胞消化液為胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞外基質(zhì)）水解，改變細(xì)胞間的連接。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑。

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑，下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會有顏色差異？商品化胰酶溶液需要用干冰運輸，在運輸過程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時候，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會出現(xiàn)。胰酶細(xì)胞消化液和胰蛋白酶消化液是一樣的嗎？廣東胰酶哪個好

EDTA是乙二胺四乙酸，一種金屬螯合劑。湖南重組胰酶是什么

對一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡(luò)合Ca2，增加消化效力湖南重組胰酶是什么