江蘇胰酶供應(yīng)商

對一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡(luò)合Ca2，增加消化效力胰蛋白酶是一種胰絲氨酸肽鏈內(nèi)切酶，作用于多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)。江蘇胰酶供應(yīng)商

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ，EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān)，在PH 8.0和37℃時，胰酶的作用能力**強，因此使用胰酶時，應(yīng)把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（0.05%）的胰酶進行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+，從而破壞細(xì)胞連接促進細(xì)胞的解離，因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用，以增強解離效果。江蘇胰酶供應(yīng)商胰蛋白酶溶液用于組織和單層細(xì)胞的解離。

胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2＋和Mg2＋。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點,通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說明：貼壁細(xì)胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液（含酚紅）,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來；此時吸除胰酶細(xì)胞消化液；加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。

胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關(guān)，在pH為8.0、溫度為37°℃時，胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時，應(yīng)把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如:D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細(xì)胞的作用。細(xì)胞培養(yǎng)中胰酶的作用一般是分解脂肪等。

    6.磷酸酶EDTA相對不溶。可以用磁力攪拌器攪拌，或?qū)⑵渲糜?度的冰箱中，溶解后過濾并**。7.可配備2-3倍血漿酶，節(jié)省時間和過濾器。使用時，請對PBS消毒。8.將儲存溶液儲存在-20°C的冰箱中，然后將溶液儲存在4°C。使用時，請勿將其放在27°C的水浴中，因為這會使自由基酶迅速無法使用。使用前放置一次。是的，因為添加的數(shù)量很少，因此通常不會凍結(jié)細(xì)胞。9.在消化過程中，向培養(yǎng)瓶中加入適量的胰酶。個人經(jīng)驗，一般在10cm培養(yǎng)皿中加。加入后，立即搖動培養(yǎng)皿蓋住胰酶。一旦充滿，用負(fù)壓吸引多余的胰酶排出，將其加入37度培養(yǎng)箱中進行消化。10.請注意，過量的胰酶對細(xì)胞有害，而過量的EDTA也會影響粘附，因此無需將細(xì)胞浸入血漿酶中進行消化。11.磷酸酶37具有**佳的消化作用，并具有在37度以下消化的能力。在消化過程中，甚至不需要將一些易于消化的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中。請注意，它不能消化太長時間。四、實驗所需試劑清單：序列產(chǎn)品名貨號CAS備注11000ul藍(lán)吸頭FT-10002氫氧化鈉JT86501310-73-23PBSHC14884EDTABSH-59-55螯合樹脂chelex100SS6072以上為EDTA-胰蛋白酶的配制，實驗請選用高質(zhì)量試劑。胰酶和胰蛋白酶不一樣，前者包括后者。江蘇胰酶供應(yīng)商

適用于貼壁細(xì)胞的消化傳代；也可用于組織細(xì)胞分離的初步消化。江蘇胰酶供應(yīng)商

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑，下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會有顏色差異？商品化胰酶溶液需要用干冰運輸，在運輸過程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時候，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會出現(xiàn)。江蘇胰酶供應(yīng)商