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常規(guī)HE染色技術(shù)服務(wù)檢測(cè)中心:專業(yè)、高效-生物醫(yī)學(xué)
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推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步的基石-細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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科研前沿的探索者-細(xì)胞遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)服務(wù)檢測(cè)中心
C)大腸埃希菌++--產(chǎn)氣腸桿菌--++志賀菌屬-+--沙門菌屬-+-+表硫化氫和尿素酶試驗(yàn)對(duì)腸桿菌屬的鑒別試驗(yàn)傷寒沙門菌甲型副傷寒沙門菌變形桿菌志賀菌屬大腸埃希菌克雷伯菌屬硫化氫試驗(yàn)-/+++++++---尿素酶試驗(yàn)--+--+乳糖發(fā)酵試驗(yàn)----++在培養(yǎng)基中加入指示劑或某種化學(xué)物質(zhì)**不需要的**生長(zhǎng),利于需要的**分離,這種培養(yǎng)基稱為選擇性培養(yǎng)基。常用的抑菌劑有膽鹽、煌綠、玫瑰紅鈉、亞硒酸鈉等。常用的指示荊有溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)等。美藍(lán)是氧化還原指示劑。例如,在培養(yǎng)基內(nèi)加入青霉素可**革蘭陽(yáng)性**,而利于革蘭陰性**的生長(zhǎng);如果加入鏈霉素,則可獲得與加青霉素相反的選擇效果;加入制霉素可*****,有利于**的分離。又如亞**鉍瓊脂,既能**革蘭陽(yáng)性**生長(zhǎng),又能**許多革蘭陰性**生長(zhǎng),但傷寒沙門菌卻能在這個(gè)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出具有棕色環(huán)的菌落。SS瓊脂是臨床**檢驗(yàn)中一種常用的選擇性培養(yǎng)基。大腸埃希菌在SS培養(yǎng)基上,因發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸,使指示劑中性紅變深,并使膽鹽沉淀,所以菌落紅色而不透明。沙門菌分解含硫氨基酸而產(chǎn)生硫化氫,硫化氫與枸櫞酸鐵形成硫化鐵,所以菌落中心呈黑色。痢疾志賀菌,既不發(fā)酵乳糖也不產(chǎn)生硫化氧。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出高效的穩(wěn)定性。中國(guó)臺(tái)灣減血清培養(yǎng)基價(jià)目表
二氧化碳不斷被釋放,培養(yǎng)液變酸,pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中**常用的pH指示劑,但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進(jìn)行判斷,需要實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)積累,存在較大的主觀性。實(shí)際上,個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基或是無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅,只能通過(guò)pH計(jì)或者pH電極進(jìn)行pH值的檢測(cè),結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。緩沖能力細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中造成細(xì)胞培養(yǎng)液pH波動(dòng)的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過(guò)程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸,細(xì)胞培養(yǎng)液pH很快下降;打開培養(yǎng)器具時(shí)CO2逸出則會(huì)引起pH升高。細(xì)胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng),按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值:H2O+CO2→H2CO3?H++HCO3-NaHCO3?Na++HCO3-此外,還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細(xì)胞毒性小、成本低,在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為***。另一種較為常用的緩沖液是HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)液,它是一種非離子兩性緩沖液,在pH~。高濃度的HEPES可能對(duì)細(xì)胞**性作用,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)HEPES的添加濃度一般為10~25mmol/L。滲透壓細(xì)胞必須生活在等滲的環(huán)境中,大多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。研究顯示。西藏?zé)o血清培養(yǎng)基報(bào)價(jià)減血清培養(yǎng)基提高了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的可靠性和重復(fù)性。
4、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基,其不含碘化鉀,在絕大多數(shù)植物中,碘元素不是必需元素,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)去除碘化鉀對(duì)植物**培養(yǎng)沒(méi)有影響,并且植物在脫離培養(yǎng)基進(jìn)行后期培養(yǎng)時(shí)仍可以從土壤等基質(zhì)中富集碘元素,去掉碘化鉀成分,也簡(jiǎn)化了培養(yǎng)基配制過(guò)程。5、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基,其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o,該替換減少的**根離子通過(guò)適當(dāng)增加**銨成分來(lái)補(bǔ)充,該替換主要基于兩個(gè)特征,一方面,nafeedta是可溶性螯合鐵,更容易被植物吸收,有利于植物葉綠體發(fā)育,另一方面,發(fā)明人發(fā)現(xiàn),na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等眾多植物**培養(yǎng)基原始ph偏低及ph波動(dòng)大的主要原因,本發(fā)明培養(yǎng)基中使用nafeedta之后,經(jīng)ph為,而植物**適宜生長(zhǎng)的ph一般為,因此,使用nafeedta既促進(jìn)了植物對(duì)鐵離子的吸收,又有利于培養(yǎng)基ph的穩(wěn)定。6、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基,其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量,增加了cuso4·5h2o、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇的用量,該改變特征在于,有效減少愈傷**玻璃化發(fā)生,減少酚類物質(zhì)產(chǎn)生,提高愈傷**的出愈率,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),優(yōu)化后的培養(yǎng)基出愈時(shí)間提前,對(duì)多種植物的愈傷**誘導(dǎo)是有益的。
式中:N0—開始**(t=0)時(shí)原有活菌數(shù);Nt----經(jīng)時(shí)間t后殘存活菌數(shù)。k:意義同上;t:表示理論**時(shí)間k=()logNt/N0;比死亡速率常數(shù)K,K值大,表明微生物容易死亡。理論**時(shí)間的計(jì)算需要注意以下幾個(gè)問(wèn)題:(1)K值因不同的微生物種類不同、不同的生理狀態(tài)、不同的外界環(huán)境,差別很大,實(shí)質(zhì)上,它是微生物熱阻的一種表示形式,微生物的熱阻越大,K值也越小。可以取耐熱性芽孢桿菌的K進(jìn)行計(jì)算。(2)在計(jì)算過(guò)程中,N0,Nt如何取值?N0為**開始時(shí)培養(yǎng)基中活微生物數(shù),可以參考一般培養(yǎng)基中的活微生物數(shù)為(1-2)×107個(gè)/ml;Nt通常取,既**失敗的概率為千分之一。(3)上述**時(shí)間,通常稱之為理論**時(shí)間,只可以用于工程計(jì)算中,在實(shí)踐過(guò)程中,因蒸汽的壓力問(wèn)題(不穩(wěn)定)、蒸汽的流量問(wèn)題有很大差別,甚至培養(yǎng)基中的固體顆粒的大小、培養(yǎng)基的粘度等因素,都會(huì)影響**效果,實(shí)際的設(shè)計(jì)和操作計(jì)算時(shí)間可作適當(dāng)比例的延長(zhǎng)或縮短。在實(shí)際生產(chǎn)中,通常采用經(jīng)驗(yàn)數(shù)值:間歇**,121℃,20—30分鐘;連續(xù)**,137℃,15—30s,在維持罐中保溫8—20分鐘。4、**溫度的選擇在培養(yǎng)基**過(guò)程中,除了雜菌死亡,還伴隨著培養(yǎng)基成分的破壞。因此必須選擇既能達(dá)到**目的。無(wú)酚紅培養(yǎng)基確保了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
SLM)低血清培養(yǎng)基添加1%小牛血清在轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)CHO細(xì)胞生產(chǎn)EOP,可提高收液次數(shù),每次收液表達(dá)量明顯提高。概述無(wú)血清培養(yǎng)基是用來(lái)在無(wú)血清條件下生長(zhǎng)特殊類型的細(xì)胞或進(jìn)行專門應(yīng)用的培養(yǎng)基。一般是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補(bǔ)充因子組成。無(wú)血清培養(yǎng)基中沒(méi)有添加血清,但含有個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。無(wú)血清培養(yǎng)基與無(wú)蛋白培養(yǎng)基的區(qū)別在于培養(yǎng)基中沒(méi)有添加蛋白,但含有一些動(dòng)物或植物來(lái)源成分,如低分子量肽的水解物。還有一種化學(xué)限定培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中不含有蛋白、水解產(chǎn)物或未知結(jié)構(gòu)的組分,所有成分均有已知的化學(xué)結(jié)構(gòu)。***:1)未知組分少;2)培養(yǎng)基中不存在血清中的抗體、補(bǔ)體等成分,對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞影響小;3)雜蛋白含量少,生產(chǎn)的產(chǎn)品后期處理較容易,例如*苗生產(chǎn)由于人用*苗需要純化減少雜蛋白,純化過(guò)程中成本消耗很大,*苗的損失也很大;4)無(wú)血清培養(yǎng)既可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的大規(guī)模懸浮培養(yǎng),增加培養(yǎng)液的利用率,可以采用發(fā)酵罐培養(yǎng)減少了人力消耗。缺點(diǎn):目前為止不是所有的細(xì)胞都能在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。無(wú)血清培養(yǎng)基的某些組分價(jià)格昂貴,導(dǎo)致無(wú)血清無(wú)法工業(yè)推廣的主要原因。RPMI1640培養(yǎng)基在抗體生產(chǎn)和免疫研究中有重要作用。廣東RPMI1640培養(yǎng)基進(jìn)口
DMEM培養(yǎng)基在組織工程中有重要應(yīng)用。中國(guó)臺(tái)灣減血清培養(yǎng)基價(jià)目表
1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:中雙11號(hào)油菜種子在1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)9d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,葉色濃綠,莖稈粗壯、平均莖中粗為,根系發(fā)達(dá)、平均根數(shù)為(>)、平均主根長(zhǎng)為。如圖3所示。培養(yǎng)實(shí)例3和對(duì)比培養(yǎng)例3的培養(yǎng)結(jié)果比較:中雙11號(hào)油菜種子在1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基和1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%;在相同條件下培養(yǎng)9d時(shí),與1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基相比,1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的幼苗長(zhǎng)勢(shì)更佳,其株高、根的數(shù)目?jī)?yōu)于1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基,莖粗及平均主根長(zhǎng)度與1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基相近。如圖3所示。培養(yǎng)實(shí)例4:馬鈴薯無(wú)菌苗培養(yǎng)生長(zhǎng)培養(yǎng)基配制:1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l,用超純水溶解,。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。培養(yǎng)方法:以克新18號(hào)馬鈴薯為例,將配制好的1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基分裝于長(zhǎng)、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,選擇生長(zhǎng)旺盛的馬鈴薯脫毒苗,于無(wú)菌環(huán)境下,根據(jù)實(shí)際需要,用手術(shù)剪刀剪取約1cm長(zhǎng)的至少帶有1個(gè)葉芽的莖端或莖段,用彎頭鑷子將其1/3-1/2長(zhǎng)度垂直插入培養(yǎng)基中;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強(qiáng)度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間14h、黑暗時(shí)間10h)條件下培養(yǎng)。中國(guó)臺(tái)灣減血清培養(yǎng)基價(jià)目表