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SLM)低血清培養(yǎng)基添加1%小牛血清在轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)CHO細(xì)胞生產(chǎn)EOP,可提高收液次數(shù),每次收液表達(dá)量明顯提高。概述無血清培養(yǎng)基是用來在無血清條件下生長特殊類型的細(xì)胞或進(jìn)行專門應(yīng)用的培養(yǎng)基。一般是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補充因子組成。無血清培養(yǎng)基中沒有添加血清,但含有個別蛋白或大量蛋白組分。無血清培養(yǎng)基與無蛋白培養(yǎng)基的區(qū)別在于培養(yǎng)基中沒有添加蛋白,但含有一些動物或植物來源成分,如低分子量肽的水解物。還有一種化學(xué)限定培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中不含有蛋白、水解產(chǎn)物或未知結(jié)構(gòu)的組分,所有成分均有已知的化學(xué)結(jié)構(gòu)。***:1)未知組分少;2)培養(yǎng)基中不存在血清中的抗體、補體等成分,對培養(yǎng)細(xì)胞影響??;3)雜蛋白含量少,生產(chǎn)的產(chǎn)品后期處理較容易,例如*苗生產(chǎn)由于人用*苗需要純化減少雜蛋白,純化過程中成本消耗很大,*苗的損失也很大;4)無血清培養(yǎng)既可以實現(xiàn)細(xì)胞的大規(guī)模懸浮培養(yǎng),增加培養(yǎng)液的利用率,可以采用發(fā)酵罐培養(yǎng)減少了人力消耗。缺點:目前為止不是所有的細(xì)胞都能在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。無血清培養(yǎng)基的某些組分價格昂貴,導(dǎo)致無血清無法工業(yè)推廣的主要原因。使用減血清培養(yǎng)基能減少實驗的誤差和干擾。中國臺灣F12培養(yǎng)基包括什么
擬南芥根愈傷**誘導(dǎo)時,培養(yǎng)6-9d在切口處開始出現(xiàn)少量顆粒狀愈傷**,培養(yǎng)20-22d獲得淡黃色松脆型愈傷**,在愈傷**周圍觀察到大量致密分布的白毛,顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100%。如圖5所示。培養(yǎng)實例5和對比培養(yǎng)例5的誘導(dǎo)結(jié)果比較:用上述方法進(jìn)行哥倫比亞擬南芥葉片和根愈傷**誘導(dǎo)時,cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100%,但cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的愈傷**出愈時間比ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基提前至少1d;在相同培養(yǎng)條件下,與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基相比,經(jīng)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)的葉片團塊狀愈傷**更大、誘導(dǎo)的根愈傷**更多。如圖5所示。培養(yǎng)實例6:本氏***葉片及根愈傷**誘導(dǎo)培養(yǎng)實例6與培養(yǎng)實例5不同的地方在于,步驟(1)將;步驟(2)將2,;步驟(3)所取葉片為本氏***無菌苗葉片,用手術(shù)剪刀將無菌葉片剪成,用鑷子將其平鋪于誘導(dǎo)培養(yǎng)基;步驟(4)所取根為本氏***無菌苗的根,cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:本氏***葉片愈傷**誘導(dǎo)時,培養(yǎng)15-18d的葉片明顯增大增厚,葉片四周產(chǎn)生大量的淡綠色致密的愈傷**,愈傷**誘導(dǎo)率為100%,且在愈傷**團塊上已開始產(chǎn)生多個嫩綠色的不定芽;本氏***根愈傷**誘導(dǎo)時,培養(yǎng)9-11d在切口處產(chǎn)生大量淡黃色致密的愈傷**。山東減血清培養(yǎng)基哪家好RPMI1640培養(yǎng)基提高了細(xì)胞的存活率和生長速率。
愈傷**誘導(dǎo)率為100%。如圖6所示。對比培養(yǎng)例6:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例6,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:本氏***葉片愈傷**誘導(dǎo)時,培養(yǎng)15-18d的葉片略微增厚,在葉片四周產(chǎn)生較少的淡綠色愈傷**,愈傷**誘導(dǎo)率為90%,在愈傷**團塊上產(chǎn)生的嫩綠色不定芽數(shù)量較少;本氏***根愈傷**誘導(dǎo)時,培養(yǎng)9-11d在切口處產(chǎn)生大量淡黃色致密的愈傷**,愈傷**誘導(dǎo)率為100%。如圖6所示。培養(yǎng)實例6和對比培養(yǎng)例6的誘導(dǎo)結(jié)果比較:用上述方法進(jìn)行本氏***葉片愈傷**誘導(dǎo)時,cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基愈傷**誘導(dǎo)率為100%,而ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率*為90%,在所述相同培養(yǎng)條件下,與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基相比,cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基可更快誘導(dǎo)出大量致密的葉片愈傷**、產(chǎn)生更多的不定芽;用上述方法進(jìn)行本氏***根愈傷**誘導(dǎo)時,cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的根愈傷**形態(tài)相近,兩種培養(yǎng)基的根愈傷**誘導(dǎo)率均為100%。如圖6所示。培養(yǎng)實例7:水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)(1)水稻種子消毒及篩選:a、選種:以秈稻縉恢10號為例,將水稻種子晾曬干燥后于4℃下長期保存,挑選籽粒飽滿、大小基本一致的水稻種子,用剪刀從種子中部剪開,去除谷殼。
本發(fā)明涉及植物**培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域,尤其是涉及一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法。背景技術(shù):繡球(hydrangeamacrophylla)為虎耳草科繡球?qū)俾淙~灌木,別名八仙花、**花、粉團花、雪球花、草繡球等,是園林上應(yīng)用***的觀賞植物。原產(chǎn)于我國長江流域及以南,自然株高2m。葉對生,倒卵或橢圓形,邊緣有鋸齒,傘房花序頂生,直徑20cm,近球形?;ㄉ嘧?,青白色,漸轉(zhuǎn)粉紅色,再轉(zhuǎn)紫紅色,花色美艷。其花色又常隨土壤的酸堿度而改變,土壤ph值4~6時,花色多呈藍(lán)色;ph值,則呈紅色。繡球花葉片翠綠,花色鮮艷,盛開時花團錦簇,美麗多姿,每簇花可開2個月之久,觀賞期長。由于繡球花的孕性花極為少數(shù),所以不易結(jié)種,常用分株、壓條或扦插方法繁殖,但分株、壓條繁殖倍率低,速度慢,而扦插繁殖又會受到季節(jié)的限制,不能常年生產(chǎn)苗木,很難滿足市場的需求。技術(shù)實現(xiàn)要素:針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足,本發(fā)明的目的之一是提供一種繁殖周期短,效率高,成本低的繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法。本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)的:一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法,具體步驟如下:s1:外植體選擇;s2:外植體消毒;s3:誘導(dǎo)培養(yǎng);s4:增殖培養(yǎng);s5:生根培養(yǎng),其中。無血清培養(yǎng)基確保了實驗結(jié)果的高度準(zhǔn)確性。
但酚紅在無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細(xì)胞生長。碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng),此外還具有調(diào)節(jié)滲透壓的作用。通常產(chǎn)品使用說明中的碳酸氫鈉推薦量是一個標(biāo)準(zhǔn)、安全量,是在科學(xué)的基礎(chǔ)上根據(jù)實踐經(jīng)驗所得。但是由于不同的細(xì)胞系(株)不同,同一株細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境也可能不同(細(xì)胞耐受性不同等),且存在的地域性水質(zhì)差異等,在實際生產(chǎn)過程中也可稍作改動,但使用者需做相應(yīng)的檢測(理化及細(xì)胞生產(chǎn)試驗等)。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH~,在高濃度時對一些細(xì)胞可能**。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10~25mmol/L。**酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是在沒有葡萄糖的條件下,細(xì)胞也可以代謝**酸鈉。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,4℃下放置1周可分解50%,使用中**好單獨配制,置-20℃冰箱中保存,使用前加入細(xì)胞培養(yǎng)液中。無血清培養(yǎng)基提供了無血清的純凈環(huán)境。貴州MEM a培養(yǎng)基有哪些
無血清培養(yǎng)基提供了純凈的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境。中國臺灣F12培養(yǎng)基包括什么
一般情況下應(yīng)調(diào)pH比所需值低~,因過濾**后,pH值會升高約。8)在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,建議不加或加少量的***,如血清的濃度較低則所加***的量也要相應(yīng)降低一些。9)建議用1NHCl或1NNaOH來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,因為用碳酸氫鈉來調(diào)對培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。如下圖所示:圖6-1MEM培養(yǎng)基(SLM,MD611)在pH值相同情況下所加的碳酸氫鈉、氫氧化鈉的量及所對應(yīng)的培養(yǎng)液滲透壓圖6-2199培養(yǎng)基(MD502)在pH值相同情況下所加的碳酸氫鈉、氫氧化鈉的量及所對應(yīng)的培養(yǎng)液滲透壓培養(yǎng)基**培養(yǎng)基的**方法主要有兩種,高壓**及um微孔濾膜過濾**。與過濾相比,高壓**的工作強度小,相對便宜,失敗率低,但易造成營養(yǎng)成分的流失。高壓**某些培養(yǎng)基(如MEM)可進(jìn)行高壓**,例如清大天一的MEM培養(yǎng)基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉,可在高壓**后加入。另外可高壓的谷氨酸鹽(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)可代替L-谷氨酰胺。為保證高壓**的效果,**設(shè)備的驗證很關(guān)鍵,可高壓**的培養(yǎng)基在121℃、15psi,15分鐘的條件下完全可達(dá)到**效果及營養(yǎng)成分的**小損失,因此不需將**時間延長。過濾**大多數(shù)培養(yǎng)基采用~μm孔徑的微孔濾膜進(jìn)行過濾**,并且已成為培養(yǎng)基**的發(fā)展方向。中國臺灣F12培養(yǎng)基包括什么