培養(yǎng)實例2:蘭茲貝格型擬南芥無菌植株培養(yǎng)培養(yǎng)實例2與培養(yǎng)實例1不同的地方在于:步驟(1)所用種子為蘭茲貝格(ler,landsbergerecta)型擬南芥種子,蘭茲貝格擬南芥較哥倫比亞擬南芥具有更早的花期,在適宜條件下培養(yǎng),可以獲得處于各發(fā)育時期的擬南芥無菌***,包括根、胚軸、葉柄、子葉、蓮座葉、莖、花、角果等,其余完全同培養(yǎng)實例1。1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達、平均**大蓮座葉長為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長為,花序含有較多花朵,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。對比培養(yǎng)例2:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例2,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達、平均**大蓮座葉長為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長為,花序發(fā)育良好,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。無血清培養(yǎng)基有助于維持細胞的純凈生長環(huán)境。中國香港減血清培養(yǎng)基報價
CD3-CD56+:50%-90%NK細胞無血清培養(yǎng)基制劑制備過程中,需要對細胞進行3次清洗,在大量的實驗中會發(fā)現(xiàn),在清洗細胞的過程中往往會損失大量細胞,少則30%多則50%。友康研**細胞回收液干細胞溫和消化酶專門用于干細胞的消化,包括臍帶間充質干細胞,脂肪間充質干細胞,胚胎干細胞(ES)等。消化作用其溫和,對細胞的干細胞溫和消化酶(500mL/瓶)T細胞無血清培養(yǎng)基可用于Car-T細胞的培養(yǎng)。培養(yǎng)時可不添加任何自體血漿。T細胞無血清培養(yǎng)基用于HEK293細胞的培養(yǎng)及重組蛋白的表達,HEK293蛋白表達無血清培養(yǎng)基成分明確,比較大細胞密度可達7×10E6cells/mHEK293蛋白表達無血清培養(yǎng)基GMP級細胞凍存液不含蛋白、不含DMSO,化學成分明確。是可作為細胞*物*用輔料的凍存液。GMP級細胞凍存液友康生物免*細胞無血清培養(yǎng)基(CIK),用于單核細胞向CIK細胞的體外誘導及體外大規(guī)模擴增培養(yǎng)。免*細胞無血清培養(yǎng)基用于懸浮HEK293細胞(如293T、293S、293F、293A等)的連續(xù)培養(yǎng)以及外源基因的瞬時表達,尤其在包裝慢**過程中表HEK293全懸浮無血清培養(yǎng)基CHO無血清培養(yǎng)基,無血清,低蛋白;采用批次培養(yǎng),CHO比較大生長密度可達9E6cells/mL。新疆無血清培養(yǎng)基一般多少錢F12培養(yǎng)基適用于多種類型的細胞培養(yǎng)實驗。
微量元素在細胞內通常以與有機物結合的形式存在。其中鐵在細胞中參與氧的轉運;鈷是維生素B12的組成部分,參與葉酸的合成和脂肪酸的合成;鎳能夠***脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細胞內具有重要功能的酶,還具有穩(wěn)定核酸結構的功能;亞硒酸鈉中的硒,作為谷胱甘肽過氧化物酶的輔基,具有抗過氧化物能力,參與消除細胞內的脂肪酸過氧化物,提高細胞的生長速率和活性。在低血清、無血清細胞培養(yǎng)基中,為滿足細胞生長增殖需要,常常添加一些成份:蛋白質、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產物、脂類、及一些血清替代因子等。其中蛋白質具有重要的作用,動物細胞對許多物質(難溶于水的離子或脂類物質)的攝取需要借助蛋白質的傳遞作用,如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、***、礦物質等促進細胞生長。轉鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白,能夠結合鐵,促進細胞對鐵離子的吸收,并具有***作用,其促生長作用可能與其具有生長因子的功能有關。胰島素可促進細胞對葡萄糖和氨基酸的利用,商業(yè)化中一些生長因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中,主要用來刺激細胞增殖,并可促進糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細胞生長的化合物,是腦磷酸的合成前提。
愈傷**誘導率為100%。如圖6所示。對比培養(yǎng)例6:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例6,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導培養(yǎng)基的誘導結果為:本氏***葉片愈傷**誘導時,培養(yǎng)15-18d的葉片略微增厚,在葉片四周產生較少的淡綠色愈傷**,愈傷**誘導率為90%,在愈傷**團塊上產生的嫩綠色不定芽數(shù)量較少;本氏***根愈傷**誘導時,培養(yǎng)9-11d在切口處產生大量淡黃色致密的愈傷**,愈傷**誘導率為100%。如圖6所示。培養(yǎng)實例6和對比培養(yǎng)例6的誘導結果比較:用上述方法進行本氏***葉片愈傷**誘導時,cs誘導培養(yǎng)基愈傷**誘導率為100%,而ms誘導培養(yǎng)基的誘導率*為90%,在所述相同培養(yǎng)條件下,與ms誘導培養(yǎng)基相比,cs誘導培養(yǎng)基可更快誘導出大量致密的葉片愈傷**、產生更多的不定芽;用上述方法進行本氏***根愈傷**誘導時,cs誘導培養(yǎng)基與ms誘導培養(yǎng)基誘導出的根愈傷**形態(tài)相近,兩種培養(yǎng)基的根愈傷**誘導率均為100%。如圖6所示。培養(yǎng)實例7:水稻成熟胚愈傷**誘導(1)水稻種子消毒及篩選:a、選種:以秈稻縉恢10號為例,將水稻種子晾曬干燥后于4℃下長期保存,挑選籽粒飽滿、大小基本一致的水稻種子,用剪刀從種子中部剪開,去除谷殼。MEM培養(yǎng)基含有多種必需的營養(yǎng)成分。
無血清培養(yǎng)基,一般是在合成培養(yǎng)基的基礎上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達到既能滿足動物細胞培養(yǎng)的要求,又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分,才能幫助細胞貼壁生長,包括以下幾大類物質:1)促貼壁物質:一般為細胞外基質,如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉*細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質細胞、CHO細胞、成肌細胞等。2)促生長因子及***:針對不同細胞添加不同的生長因子。***也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質,有些***是許多細胞必不可少的,如胰島素。3)酶**劑:培養(yǎng)貼壁生長的細胞,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中需含酶**劑,以終止酶的消化作用,達到保護細胞的目的。**常用的是大豆胰酶**劑。4)結合蛋白和轉運蛋白:常見如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護細胞免受機械損傷。許多旋轉式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。MEM培養(yǎng)基適合多種類型的細胞培養(yǎng)實驗。中國香港減血清培養(yǎng)基報價
MEM培養(yǎng)基提供了細胞生長所需的基本營養(yǎng)成分。中國香港減血清培養(yǎng)基報價
但酚紅在無血清細胞培養(yǎng)基中可能帶來胞內鈉/鉀失衡,影響細胞生長。碳酸氫鈉在細胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng),此外還具有調節(jié)滲透壓的作用。通常產品使用說明中的碳酸氫鈉推薦量是一個標準、安全量,是在科學的基礎上根據(jù)實踐經(jīng)驗所得。但是由于不同的細胞系(株)不同,同一株細胞適應環(huán)境也可能不同(細胞耐受性不同等),且存在的地域性水質差異等,在實際生產過程中也可稍作改動,但使用者需做相應的檢測(理化及細胞生產試驗等)。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH~,在高濃度時對一些細胞可能**。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10~25mmol/L。**酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是在沒有葡萄糖的條件下,細胞也可以代謝**酸鈉。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,4℃下放置1周可分解50%,使用中**好單獨配制,置-20℃冰箱中保存,使用前加入細胞培養(yǎng)液中。中國香港減血清培養(yǎng)基報價