云南Ham's F12培養(yǎng)基哪個好

    平衡鹽溶液（balancedsaltsolution，BSS）簡稱鹽溶液，集緩沖液的緩沖能力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應(yīng)特點于一體，兼具維持滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、同時供給細胞生存所必需的能量和無機離子成分的作用。各種BSS的緩沖系統(tǒng)有所不同，其中以Hank’s液和Earle’s液為例，它們主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hank’s液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存**，需要用Earle’s液，。如果**是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的**，用Hank’s液就可以了。表3-1幾種常用的平衡鹽溶液配方（g/L）一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成分，同時參與許多重要的細胞功能活動。但它們有使細胞凝集的作用，在配制分散細胞的消化液和特殊用途的細胞洗滌時，宜采用Ca2+、Mg2+含量較低的Dulbecco液或無Ca2+、Mg2+的D-Hanks液，或者PBS液。概述基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。減血清培養(yǎng)基提高了細胞培養(yǎng)的重復(fù)性和可靠性。云南Ham's F12培養(yǎng)基哪個好

    1)、初代培養(yǎng)：繡球外植體，將葉片剪去，自來水沖洗干凈。在超凈工作臺上把已經(jīng)沖洗干凈的外植體浸入75％酒精中消毒30s，用無菌水沖洗3～4次。使用白貓漂白水和無菌水按1：4的體積比配制消毒液，將外植體放入消毒液浸泡40min，其中白貓漂白水為上海白貓(集團)有限公司生產(chǎn)的“白貓”牌家用漂白水。消毒完成，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，建立無菌再生系統(tǒng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)環(huán)境為光照強度1500lx條件下，溫度25℃，光照時間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時間8h，培養(yǎng)6～8周。其中誘導(dǎo)培養(yǎng)基為ms+～～，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的ph值為。(2)、繼代培養(yǎng)：以建立的無菌再生系統(tǒng)為對象，將無菌外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基，其中增殖培養(yǎng)基為ms+～～，培養(yǎng)環(huán)境為光照強度1500lx條件下，溫度25℃，光照時間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時間8h，培養(yǎng)8～12周。每隔8～12周轉(zhuǎn)接入新的增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基的ph值為。(3)、生根培養(yǎng)：經(jīng)過繼代培養(yǎng)的繡球組培苗，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，其中生根培養(yǎng)基為1/2ms+～～，生根培養(yǎng)基的ph值為。誘導(dǎo)培養(yǎng)環(huán)境為光照強度1500lx條件下，溫度25℃，光照時間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時間8h，培養(yǎng)8～12周。。云南DMEM高糖培養(yǎng)基答疑解惑F12培養(yǎng)基適用于基因編輯和轉(zhuǎn)染實驗。

    導(dǎo)致細胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效。控制細胞培養(yǎng)基中**和霉菌，是延長細胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華******典》2005版二部附錄第100頁的口服給*制劑的微生物限度標準，并嚴于該標準，規(guī)定細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的**數(shù)每1g不得超過200個，霉菌數(shù)每1g不得超過50個。稱取樣品1g，加入無菌純化水10mL溶解，混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行，檢查項目為**數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。細胞生長試驗這是一個性能特性表述的要求。細胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動物細胞，因此經(jīng)過細胞培養(yǎng)效果的檢驗是產(chǎn)品***劣的直觀表述，這也是很多生物制*用戶要求的一項指標。目前國內(nèi)尚無細胞培養(yǎng)和計數(shù)的法定方法，可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)》中細胞計數(shù)法論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng)，前四天用含10％小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)并計數(shù)，檢查細胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)并計數(shù)，檢查細胞培養(yǎng)基中是否有不利細胞生長的***。本試驗用細胞為VERO細胞。四、細胞培養(yǎng)基的使用方法細胞培養(yǎng)基的種類繁多，細胞培養(yǎng)方式也較多。

    從而使培養(yǎng)基的預(yù)熱、加熱**及冷卻過程可在同一設(shè)備內(nèi)完成。該流程的加熱和冷卻時間比噴射加熱連續(xù)**流程要長些，但由于在培養(yǎng)基的預(yù)熱過程同時也起到了**后培養(yǎng)基的冷卻，因而節(jié)約了蒸汽和冷卻水的用量。（2）蒸汽直接噴射型的連續(xù)**系統(tǒng)流程中采用了蒸汽噴射器，它使培養(yǎng)液與高溫蒸汽直接接觸，從而在短時間內(nèi)可將培養(yǎng)液急速升溫至預(yù)定的**溫度然后在該溫度下維持一段時間**，**后的培養(yǎng)基通過一膨脹閥進入真空冷卻器急速冷卻，從圖中可以看出，由于該流程中培養(yǎng)基受熱時間短，營養(yǎng)物質(zhì)的損失也就不很嚴重，同時該流程保證了培養(yǎng)基物料**先出，避免了過熱或**不徹底等現(xiàn)象。（3）由連消塔、維持罐和噴淋冷卻組成的**系統(tǒng)連續(xù)**的基本設(shè)備一般包括：①配料預(yù)熱罐，將配制好的料液預(yù)熱到60-70℃，以避免連續(xù)**時由于料液與蒸汽溫度過大而產(chǎn)生水汽撞擊聲；②連消塔，連消塔的作用主要是使高溫蒸汽與料液迅速接觸混和，并使料液的溫度很快升高到**溫度（126-132）℃；③維持罐，連消塔加熱的時間很短，光靠這段時間的**是不夠的，維持罐的作用是使料液在**溫度下保持5-7min，以達到**的目的；④冷卻管，從維持罐出來的料液要經(jīng)過冷卻排管進行冷卻。F12培養(yǎng)基適用于神經(jīng)細胞和其他敏感細胞系。

    這里介紹熱力消毒**法。高熱破壞微生物蛋白質(zhì)、核酸、細胞壁和細胞膜，從而導(dǎo)致微生物死亡。受高熱作用后，蛋白質(zhì)分子運動加快，肽鏈連接鍵斷裂，蛋白變性凝固；細胞膜功能受損使胞內(nèi)物質(zhì)漏出，**內(nèi)外環(huán)境平衡失調(diào)。不同種類微生物對熱的耐受力不同，多數(shù)無芽胞**經(jīng)55-60℃作用30-60分鐘后死亡，100℃時迅速死亡。有芽胞**則對高溫有強的抵抗力，如肉毒芽胞梭菌煮沸需3—5小時才死亡。熱力**分干熱**法和濕熱**法兩大類，相同溫度下后者較前告效力大，其原因是：①濕熱環(huán)境中菌體蛋白易凝固；②濕熱穿透力比干熱大；③濕熱蒸氣變?yōu)橐簯B(tài)時可釋放潛熱，迅速提高被**物體的溫度。1．干熱（dryheat）**法(1)焚燒。直接點燃或在焚燒爐內(nèi)進行，*適用于廢棄物品或動物尸體。(2)燒灼。直接以火焰**，適用于微生物學(xué)實驗室接種環(huán)、針和試管口等**。(3)干烤。在干烤箱內(nèi)進行，加熱至150-180℃2-4小時達到**效果，適用于高溫下不變質(zhì)、不被破壞和不蒸發(fā)的物品，如玻璃器皿、瓷器，不能用于塑料、棉、紙制品。2．濕熱(moistheat)消毒**法(1)巴氏消毒法。巴氏消毒法(pasteurization)是用較低溫度殺滅液體中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐熱成分的方法。F12培養(yǎng)基提供了豐富的營養(yǎng)，支持細胞增殖。云南減血清培養(yǎng)基進貨價

MEM培養(yǎng)基含有多種必需的營養(yǎng)成分和礦物質(zhì)。云南Ham's F12培養(yǎng)基哪個好

    可通過在細胞培養(yǎng)基中添加一些保護劑，降低細胞-氣體和細胞-液體的表面張力，減少氣泡的形成。4.細胞培養(yǎng)基的**及儲存**方式及注意事項細胞培養(yǎng)基**的方式分為高壓**和膜過濾**，不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同，**方式也可能不同。①高壓**某些培養(yǎng)基（如MEM）可進行高壓**，這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓**后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺?？筛邏?*的培養(yǎng)基在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達到**效果及營養(yǎng)成分的**小損失，不需將**時間延長。絕大多數(shù)細胞培養(yǎng)基不適宜高壓**。因培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質(zhì)、多肽、生長因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用過濾消毒以除去**?？晒┻^濾**使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過濾**是當前較為常用及便捷的一種方法，常采用μm孔徑的濾膜，部份采用μm孔徑。與高壓過濾方式相比，濾膜具有使用期限且價格較高，但對細胞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份破壞性較小。通常液體細胞培養(yǎng)基避免-20℃凍存。云南Ham's F12培養(yǎng)基哪個好