單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)是在單細(xì)胞分辨率下精確分析細(xì)胞異質(zhì)性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的新技術(shù)，提供了全新的視角來分析細(xì)胞的分化路徑、細(xì)胞間的交互調(diào)控和細(xì)胞亞群的分離現(xiàn)象。轉(zhuǎn)錄組、表觀基因組、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)的差異賦予了組織內(nèi)同樣基因組背景下的單個(gè)細(xì)胞的功能特異性。單個(gè)細(xì)胞的組學(xué)變化決定了組織的功能狀態(tài)，因此，闡明組織的細(xì)胞異質(zhì)性是破譯生理功能和病理演變的關(guān)鍵。然而，以bulkＲＮＡ測(cè)序等為**的傳統(tǒng)方法掩蓋了細(xì)胞的異質(zhì)性，細(xì)胞組學(xué)變化的平均水平。近１０年來，單細(xì)胞組學(xué)技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，實(shí)現(xiàn)了在單細(xì)胞分辨率下研究分子的變化規(guī)律。烈冰生物為您提供一站式全流程單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)。深圳BD單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
高通量測(cè)序技術(shù)（High-throughputsequencing）又稱“下一代”測(cè)序技術(shù)（“Next-generation”sequencing），以能一次并行對(duì)幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定和一般讀長(zhǎng)較短等為標(biāo)志。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次顛覆性的改變，一次對(duì)幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定，因此在有些文獻(xiàn)中稱其為下一代測(cè)序技術(shù)(nextgenerationsequencing)足見其劃時(shí)代的改變，同時(shí)高通量測(cè)序使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為可能，所以又被稱為深度測(cè)序(deepsequencing)。而烈冰科技具有專業(yè)生物背景和十二年科研服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，已助力Nature，immunity等在內(nèi)的300+篇CNS文章發(fā)表。溫州烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持在單細(xì)胞組學(xué)技術(shù)的支持下,早期妊娠母胎界面的異質(zhì)性問題得到了更深入的闡述與理解。
針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、測(cè)序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過濾標(biāo)準(zhǔn)：由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中，并且測(cè)序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此，我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來過濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10×Genomics為例，細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn)，當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候，結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過濾。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候，選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn)；否則，選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量非常接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù)。
冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在RNA捕獲、文庫構(gòu)建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上，通過甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進(jìn)行透化處理，使細(xì)胞中的mRNA釋放，并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測(cè)序文庫進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，從而獲取基因表達(dá)信息?？傮w來說，空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫-上機(jī)測(cè)序，而需要客戶進(jìn)行樣本準(zhǔn)備的步驟相對(duì)簡(jiǎn)單：組織凍存與OCT包埋。，從多組學(xué)的角度對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行綜合分析 將是未來單細(xì)胞技術(shù)的必由之路。
分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)中也有一些集中于探究單細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。功能研究型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù),結(jié)合了強(qiáng)大的CRISPR基因編輯技術(shù),從而可以深度挖掘基因表達(dá)調(diào)控與細(xì)胞功能以及命運(yùn)決定之間的因果關(guān)系。在未來,為了更系統(tǒng)地研究多層組學(xué)之間的互動(dòng)關(guān)系對(duì)細(xì)胞命運(yùn)的影響,一方面,單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的策略會(huì)繼續(xù)向轉(zhuǎn)錄組結(jié)合其他多個(gè)組學(xué)的三組學(xué)甚至四組學(xué)方向發(fā)展.另一方面,單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)會(huì)轉(zhuǎn)向研發(fā)多組學(xué)測(cè)序分析和功能驗(yàn)證同時(shí)進(jìn)行的方法,這種探究因果關(guān)系的策略對(duì)于揭示發(fā)育和疾病發(fā)展中的關(guān)鍵因子和分子網(wǎng)絡(luò)模塊十分重要。單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)提供了全新的視角來分析細(xì)胞的分化路徑、細(xì)胞間的交互調(diào)控和細(xì)胞亞群的分離現(xiàn)象。上海single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)多組學(xué)測(cè)序
單細(xì)胞多學(xué)可包括基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、影像組學(xué)。深圳BD單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的發(fā)展依賴于各種單一組學(xué)檢測(cè)技術(shù)的完善,但即使在單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)迅速發(fā)展的情況下,在單細(xì)胞水平協(xié)同檢測(cè)多個(gè)不同的分子層面仍然非常具有挑戰(zhàn)性.每一種組學(xué)都有不同的特性和測(cè)量方法,這些方法在敏感性、特異性、通量和適用性上都有所不同.因此,在單細(xì)胞水平對(duì)多種組學(xué)方法進(jìn)行整合和應(yīng)用時(shí),需要在策略上做出改進(jìn),以保證各組學(xué)間的上游建庫以及下游生物信息分析均能良好地兼容,同時(shí)也要明確技術(shù)的局限性及其對(duì)研究結(jié)果的潛在影響。深圳BD單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析
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