16s/18s/ITS微生物分類測序,項目介紹:環(huán)境微生物是自然界中分布建議廣、種類建議多、數(shù)量比較大的生物類群,其群落結構及多樣性和微生物的功能及代謝機理是微生物生態(tài)學的研究熱點,對于我們研究微生物與環(huán)境的關系、環(huán)境治理和微生物資源的利用以及人類醫(yī)療健康有著重要的理論和現(xiàn)實意義。隨著高通量測序技術的發(fā)展以及大量序列數(shù)據(jù)的積累,通用引物擴增結合高通量測序技術,可以快速檢索環(huán)境內微生物的群落結構。這項運用我們稱之為微生物分類測序。如Illumina公司的MiSeq高通量測序平臺不僅可實現(xiàn)對多樣品的多個可變區(qū)同時測序,而且在測序速度和測序通量上都有進一步提升,目前此平臺已在微生物多樣性群落結構研究方面受到了廣大學者的認可。組織材料樣品(提取RNA用)建議將標簽用膠帶貼到管壁,干冰運輸。上海地區(qū)ITS高通量測序應用
生工其他PCR產物測序,項目介紹:隨著基因編輯技術(尤其是CRISPR-cas9技術)的發(fā)展,科研人員使用傳統(tǒng)的Sanger測序無法快速有效鑒定基因編輯效率。但是,通過對靶基因區(qū)域附近設計引物,進行PCR擴增,并對PCR產物進行高通量測序,可以快速高效的獲得目標區(qū)域的突變頻率信息,尤其是對低頻突變的檢測效果遠遠優(yōu)于一代測序,性價比極高。總DNA 或者包裝完好的原始樣品(如土壤、糞便、 水體和口腔物);樣品名稱清晰,冷藏運輸。如有對照與實驗樣品的區(qū)分,標明正常樣品與實驗樣品,如有分組,詳細描述分組分析信息,以及分組比較的分析需求信息。無參轉錄組高通量測序高通量測序技術是可以平行對數(shù)百萬甚至數(shù)十億條序列測序的技術。
轉錄組測序,項目介紹:RNA-Seq,是基于新一代測序技術的轉錄組學研究方法:首先提取生物樣品的全部轉錄的 RNA 并進行 mRNA 富集,然后反轉錄為 cDNA 后進行新一代高通量測序,在此基礎上進行短片段拼接組裝,從而獲得一個個單獨轉錄本,進而可以對該生物樣品當前狀態(tài)的基因表達狀況有全局了解。對不同階段或部位生物樣品的轉錄組進行 比較分析,則可以在轉錄層面得到基因表達水平的變化,針對關鍵基因則可以進行代謝通路(Pathway)的構建。
長鏈非編碼RNA(lncRNA)測序(只限有參考基因組物種),項目介紹:長鏈非編碼RNAs(Long non-coding RNAs,LncRNAs)是一類轉錄本長度大于200 nt且不編碼蛋白質的RNAs(不含rRNA),普遍存在于各種生物體內。哺乳動物基因組序列中4%~9%的序列產生的轉錄本是LncRNA(相應的蛋白編碼RNA比例是1%)。近年來研究表明,LncRNA參與了多種重要的調控過程,如X染色體沉默、基因組印記及染色質修飾等。通過LncRNA測序,可以快速獲得與其生物學過程或者疾病相關的LncRNA的表達變化,從而促進LncRNA的深入研究。生工高通量測序部擁有豐富的樣品處理經驗,日均處理樣品200余例。
怎樣通過血球計數(shù)板進行質檢操作呢?將血球計數(shù)板擦拭干凈,取干凈的蓋玻片蓋在計數(shù)板上;將細胞懸液混勻(或10μl臺盼藍+10μl細胞懸液),吸出10μl懸液至計數(shù)板上蓋玻片的一側使細胞核懸液鋪滿蓋玻片和計數(shù)板之間;在顯微鏡下分別對V1/V2/V3/V4四個計數(shù)區(qū)域進行計數(shù);按細胞計數(shù)公式進行計算,計算公式:細胞總數(shù)={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*懸液體積*稀釋倍數(shù),V1/V2/V3/V4為各個計數(shù)區(qū)的細胞數(shù)目,細胞活率=活細胞數(shù)目/總細胞數(shù)目*100%。對于需要進行RNA抽提的部分特殊樣品,可以將組織在液氮中研磨后用TRIzol懸浮后用普通冰袋寄送。上海市SNP高通量測序原理
一臺10xGenomics Chromium X儀器能夠在單次運行中分析數(shù)百至數(shù)十萬個細胞,讓百萬級的細胞研究變得常規(guī)。上海地區(qū)ITS高通量測序應用
為什么要用單細胞測序技術?細胞是生物體結構和功能的基本單位,在生物體生長發(fā)育的過程中,因細胞類型、外界環(huán)境以及內部調節(jié)因素的不同,其轉錄組信息也不盡相同。由于基因組和表觀遺傳的重編程,以及在細胞分裂和分化過程中出現(xiàn)的誤差造成來自同一細胞系或個體的細胞呈現(xiàn)出不同的基因組、轉錄組和表觀基因組[4]。這就是我們上面提到的細胞異質性。細胞異質性是生物組織和生物系統(tǒng)的普遍特征[5]。但是我們常規(guī)的二代測序檢測的是一個細胞群體的基因組、轉錄組的信息,如培養(yǎng)的大量細胞、動植物組織甚至是整個生物體。在過去的20多年中,人們對轉錄組的人數(shù)仍然局限在群體水平[6]。這種方法可以為我們提供大量的基因組或轉錄組數(shù)據(jù),卻無法揭示細胞的異質性。傳統(tǒng)方法得到的是細胞群的平均基因組,而單細胞測序測量的是細胞群中單個細胞的基因組[7]?,F(xiàn)在也有學者為了區(qū)分傳統(tǒng)測序和單細胞測序的區(qū)別,將傳統(tǒng)方法稱為批量測序。上海地區(qū)ITS高通量測序應用
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