酸法提取是利用一定濃度的酸溶液在一定的條件下提取膠原蛋白,主要采用低離子濃度酸性條件破壞分子間鹽鍵和希夫堿,而引起纖維膨脹、溶解,采用酸法提取的膠原蛋白通常成為酸溶性膠原蛋白。酸溶解法可將沒有交聯(lián)的膠原分子溶解出來,也可溶解含有醛胺類交聯(lián)鍵的膠原纖維,然后釋放到溶劑中。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,用低溫酸法提取的膠原很大程度的保持了其三螺旋結構,適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備。通常的做法是將適當濃度的酸液按一定料液比加入到經過預處理的骨粉中,于0~25℃攪拌提取一定時間。在采用酸法進行膠原蛋白的提取時,注意提取溫度不宜過高,以免膠原蛋白的生物活性發(fā)生破壞。取樣經前處理后,勻漿在低溫下用酸浸提,離心即可得酸溶性膠原蛋白(acid-solublecollagen,ASC)。作為溶劑使用的酸,主要有鹽酸、磷酸、甲酸、乙酸、蘋果酸、檸檬酸等,但大多數研究集中于乙酸抽提,像MariaSadowska等用,其提取率略低于乙酸提取。檸檬酸因不產生顏色和異味得以比較廣使用于食品工業(yè)的膠原蛋白的提取。 膠原蛋白就好比一鍋才煮了一會兒的奶白色雞湯。上海海參膠原蛋白粉
膠原蛋白里,膠原三肽的用途化妝品中的作用保濕、滋養(yǎng)、亮膚、緊膚、防皺、修復。CTP親和性極好,已在膜類日霜晚霜、洗發(fā)護發(fā)、洗面奶等類型產品中得到運用。食品工業(yè)的作用營養(yǎng)性、修復性、保濕性、親和性。CTP可以運用到口服美容功能食品、防止衰老老老老功能食品、補鈣功能食品、塑身功能食品及特殊人群食品(如調節(jié)女性內分泌失調、促進胃潰瘍愈合等)。作為食品添加劑可以運用到普通食品中,用作肉制品、冷凍食品、乳制品等的改良劑,使產品性狀更優(yōu),口感更好。湖南魚膠原蛋白原料廠家膠原蛋白質為主要的膠原腸衣本身是營養(yǎng)豐富的高蛋白物質。
化學方法比物理方法改。聯(lián)度高,且能獲得均勻一致的交聯(lián),對調節(jié)、控制膠原的各性質均有效。已廣泛應用于各種化學試劑交聯(lián)膠原,以提高其交聯(lián)度、力學性能及生物相容性?;瘜W改性法具體又可分為使用化學試劑交聯(lián)、側鏈的修飾、生理活性物的固定化三種方法。[130]化學試劑交聯(lián)法中常用的化學交聯(lián)劑有戊二醛、己異二氰酸酯、碳化二亞胺、疊氮二苯基磷等,其中戊二醛是應用較比較廣的試劑,大量實驗證明:戊二醛能提供有效交聯(lián),但有細胞毒性,且其用量難以控制。另外,隨著交聯(lián)度的增加,吸水能力和膨脹度卻會降低。酰基疊氮化物、聚環(huán)氧化物或京尼平交聯(lián)等,不會引入明顯的毒性,且可獲得理想的交聯(lián)效果。所見報道中,多使用單一交聯(lián)劑對膠原蛋白交聯(lián)改性,但也有使用混合交聯(lián)劑的,如為了解決人工心臟瓣膜晚期鈣化問題,篩選出環(huán)氧丙烷化學改性戊二醛處理生物瓣的方法,可明顯減低瓣膜組織膠原蛋白末端游離羧基含量。動物實驗表明,經改性后的瓣膜組織能保持較好的組織穩(wěn)定性和機械抗張強度、免疫原性測試為陰性,符合臨床應用。
可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法、透析法、離心法、電泳法和色譜法,其中鹽析法、離心法和電泳法較為常用。由于單一方法難以完全分離純化膠原蛋白,實際操作都是通過復合法來達到分離純化膠原蛋白的目的。鹽析法一般采用高濃度NaCl;離心法常選用制備型低溫超速離心機;電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE),該法既可用于膠原蛋白的分離純化,還可用來測定膠原蛋白分子的相對分子質量。像有人用破碎、酶解、鹽析三步法提純蘇尼特羊骨骼I型膠原蛋白。先去除骨頭里的非膠原物質,然后往沉淀中10%的胃蛋白酶,在4℃的條件下消化24h,以14000r/min離心40min。棄沉淀往上清液中加NaCL,使它終濃度達到,靜止過夜,再離心,現在的沉淀就是I型膠原蛋白。 作用營養(yǎng)性、修復性、保濕性、親和性。
采用酶法提取膠原蛋白時,必須嚴格控制提取條件:首先,酶作用時間必須適當。如果時間過短,膠原蛋白就不能充分釋放到提取液中,影響提取率;如果酶作用時間過長,膠原蛋白會水解過度,產生過多的苦味小分子低聚肽,不僅會增加分離純化的難度,也會影響膠原蛋白的功能特性和生物活性。其次,酶解溫度要適宜。溫度過低,酶的作用效果不明顯;溫度過高會引起酶的失活和膠原蛋白的變性。據報道,當介質pH略低于中性時,膠原蛋白的變性溫度為40~41℃,當介質pH為酸性時,膠原蛋白的變性溫度為38~39℃,而且魚皮膠原蛋白的變性溫度要比豬皮膠原蛋白的變性溫度低7~12℃。所以,如果要使提取的膠原蛋白具有良好的生物活性,在提取過程中應使提取溫度低于變性溫度。第三,需選用適當的酶。一般從陸生哺乳動物組織中提取膠原蛋白時,采用胃蛋白酶在其較適作用溫度下進行提取是合理的,但對于魚類等水生動物,由于其膠原蛋白的變性溫度比陸生哺乳動物低,因此許多蛋白酶便不適用,如果在這些酶的較適作用溫度下提取可能會破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性。采用酶法提取膠原蛋白及其多肽的研究主要是從動物皮及其加工副產物中。 膠原蛋白是人體骨骼,尤其是軟骨組織中的重要組成成分。四川骨膠原蛋白粉
膠原蛋白不易被普通蛋白酶水解,但能被動物膠原酶斷裂。上海海參膠原蛋白粉
免疫學分析和研究結果表明,使用膠原加完全弗氏佐劑,能對膠原產生多克隆和單克隆抗體。由T細胞啟動的對膠原蛋白免疫反應的證據是,位于重要組織相容性(H-2)部位上ⅠA或ⅠB亞區(qū)的免疫反應基因已被鑒定。膠原蛋白免疫原性的臨床評價通常是皮膚過敏性測試(細胞免疫指數,遲發(fā)性Ⅳ型反應)和由反應型抗體的存在(體液免疫指數)來確定的。實踐證明,在患者身上進行這兩種評價是合理的。在治好前,用過敏劑量的植入性膠原對患者進行皮試,大約3%有潛在的反應,反復多次處理的患者,大約1%~2%會產生遲發(fā)性過敏性的臨床病狀。典型的癥狀包括局部水腫和紅斑反應,有的還伴有硬化和瘙癢,持續(xù)時間4~6個月,個別甚至可達1年以上。上海海參膠原蛋白粉
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