浙江SAN HQ TF高鹽核酸酶70921-160

基因藥物常用的AAV載體有三種生產(chǎn)方法，分別是三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系、桿狀病毒表達(dá)載體體系和包裝細(xì)胞體系。其中，20多年前開發(fā)的三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)表達(dá)技術(shù)仍然占據(jù)腺相關(guān)病毒AAV生產(chǎn)的主流地位，其三質(zhì)粒分別是Helper質(zhì)粒（含E2a/b、E4和VARNA基因）、目標(biāo)基因表達(dá)質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒（含Cap和Rep基因）。雖然AAV病毒載體的血清型不同，但AAV的生產(chǎn)流程基本一致，主要有質(zhì)粒共轉(zhuǎn)宿主細(xì)胞HEK293、293細(xì)胞生產(chǎn)病毒顆粒、從細(xì)胞培養(yǎng)上清或/及細(xì)胞裂解液中收獲病毒載體、純化/制劑/無菌過濾/灌裝等流程。SAN HQ高鹽核酸酶能夠使載體表面的DNA去除更徹底，得到的AAV病毒顆粒更穩(wěn)定。浙江SAN HQ TF高鹽核酸酶70921-160

SAN HQ高鹽核酸酶發(fā)揮酶活性的條件比較廣。例如，該酶適宜的鹽濃度（NaCl）范圍是400mM-600mM，能耐受高達(dá)1M NaCl濃度。適宜反應(yīng)溫度為25℃-37℃，能耐受4℃-38℃。Mg2+濃度大于1mM即可，在5-20mM范圍即可表現(xiàn)更高活性。跟全能核酸酶類似，SAN HQ高鹽核酸酶也是一款堿性核酸酶，其適宜pH為8.0-8.9，能耐受6.8-9.5。為了達(dá)到更高酶活性，可以通過調(diào)節(jié)pH實(shí)現(xiàn)。鑒于SAN HQ的耐受性，可以用于很多應(yīng)用，如大規(guī)模生產(chǎn)、蛋白純化、蛋白組學(xué)等。天津高鹽核酸酶70921-160SAN HQ高鹽核酸酶的生產(chǎn)用原輔料是Non-animal和Non-plant來源的。

相比傳統(tǒng)的Benzonase核酸酶，SAN HQ高鹽核酸酶的優(yōu)勢(shì)是在400mM-600mM鹽濃度條件下具有適宜酶活性。在這個(gè)條件下，AAV病毒載體聚集更少、更加穩(wěn)定；SAN HQ的使用能夠簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝、降低酶用量及成本，不需額外脫鹽操作；AAV病毒載體得率更高，且HCD殘留更少、AAV產(chǎn)物更穩(wěn)定。曲光教授在2005年發(fā)表的文章中，以AAV2為例探討了引起AAV病毒聚集的因素，并探索了AAV病毒純化和制劑過程中抑制聚集的方法。該文章通過篩選發(fā)現(xiàn)，高鹽濃度能夠抑制AAV病毒團(tuán)聚，讓AAV病毒更加穩(wěn)定，且高鹽濃度并不削弱AAV病毒的侵染活性。

從國(guó)內(nèi)來看，由于 AAV 基因藥物研發(fā)管線絕大部分集中在眼科遺傳病上，載體用量較小，三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 AAV 系統(tǒng)足以滿足未來的臨床及商業(yè)需求，因此，國(guó)內(nèi)的 AAV 生產(chǎn)系統(tǒng)主要以三質(zhì)粒為主。然而，考慮到未來 AAV 基因藥物在血液、神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉系統(tǒng)等領(lǐng)域的臨床應(yīng)用，三質(zhì)粒系統(tǒng)顯然難以勝任。如藥明生基從國(guó)外收購了 OXGENE 的輔助腺病毒 AAV 生產(chǎn)系統(tǒng) TESSA，據(jù)報(bào)道較三質(zhì)粒系統(tǒng)有10倍的提升；而基因藥物 CDMO 企業(yè)北京五加和基因則在國(guó)內(nèi)率先采用了陳海峰博士的威洛克公司授權(quán)的Bac-to-AAV 系統(tǒng)，憑借公司在病毒載體領(lǐng)域持續(xù)30年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，不斷摸索、試驗(yàn)，終于在臨床級(jí)生產(chǎn)方面獲得了巨大的成功，為 AAV 基因藥物管線研發(fā)公司錦籃基因進(jìn)行多批次臨床 CDMO 代工生產(chǎn)。ArcticZymes所有產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)及銷售等都符合ISO13485:2016質(zhì)量管理體系標(biāo)準(zhǔn)。

在生物工藝流程中，需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染，而核酸酶作為外源成份，也需要在生產(chǎn)流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。AAV衣殼亞種之間因表面電荷的差異導(dǎo)致不同的的等電點(diǎn)，——空衣殼pI在6.3左右，包裝了完整基因組DNA后的病毒顆粒pI大致為5.9。而來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右，SAN HQ高鹽核酸酶pI 9.6左右。因此，在同樣的條件下，從AAV溶液中去除SAN HQ高鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。一個(gè)美國(guó)客戶對(duì)SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率進(jìn)行了評(píng)估。安徽上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-202

高鹽能夠抑制AAV病毒載體聚集，提高AAV病毒載體產(chǎn)量。浙江SAN HQ TF高鹽核酸酶70921-160

ArcticZymes Technologies致力于提供高質(zhì)量產(chǎn)品，具有良好的批間一致性、穩(wěn)定可靠的質(zhì)量、及時(shí)的文件及技術(shù)支持。ArcticZymes所有產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)及銷售等都符合ISO13485:2016質(zhì)量管理體系標(biāo)準(zhǔn)；鑒于生物制品更嚴(yán)格的質(zhì)控要求，廠家對(duì)鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品（Salt Active Nucleases，SANs）的生產(chǎn)及質(zhì)控，在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上，增加了cGMP相應(yīng)要求，如生產(chǎn)用原輔料是Non-animal和Non-plant來源的，終產(chǎn)品經(jīng)過0.22μm過濾sterilization，放行檢測(cè)包括microbes、fungus及內(nèi)毒檢測(cè)等，所有標(biāo)準(zhǔn)符合USP-EP要求。浙江SAN HQ TF高鹽核酸酶70921-160