云南IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的FabRICATOR MagIC自動(dòng)樣品制備可用于分析和監(jiān)測(cè)不同的CQA。mAb在生產(chǎn)或儲(chǔ)存過(guò)程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會(huì)影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個(gè)問(wèn)題，對(duì)6種mAb的混合物進(jìn)行強(qiáng)制降解（室溫下3個(gè)月），并通過(guò)反相LC-MS進(jìn)行分析。當(dāng)在完整水平上分析mAb時(shí)，可以檢測(cè)到mAb5豐度的顯著差異，同時(shí)出現(xiàn)許多新的峰。然而，無(wú)法獲得可靠的質(zhì)量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來(lái)源在Fab區(qū)域內(nèi)。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識(shí)別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過(guò)形成氧代內(nèi)酯 （+14 Da） 和二氧代內(nèi)酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來(lái)揭示。此外，還可檢測(cè)到mAb3輕鏈的異構(gòu)化。該示例說(shuō)明了FabRICATOR MagIC在mAb中級(jí)分析中的強(qiáng)大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無(wú)需耗時(shí)耗費(fèi)資源的肽圖分析，所有這些都以相對(duì)較少的手動(dòng)操作時(shí)間快速完成。可精確定位特定的修飾。而無(wú)需肽圖分析，可以較少的手動(dòng)操作時(shí)間快速完成。云南IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis將固定化酶固定在磁珠上，用于在鉸鏈下方自動(dòng)消化IgG。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶。這些微球能夠在中級(jí)表征工作流程中并行快速自動(dòng)酶解多種抗體。它們專(zhuān)為自動(dòng)化平臺(tái)而設(shè)計(jì)，但在無(wú)法實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的情況下，在振動(dòng)臺(tái)上的表現(xiàn)同樣出色。酶切消解后，樣品可直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)行快速色譜分析，或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進(jìn)行分析。自動(dòng)平行抗體酶切和亞基生成允許處理與克隆選擇、工藝開(kāi)發(fā)和潛在生物制藥穩(wěn)定性研究相關(guān)的大量樣品。自動(dòng)抗體亞基分析可減少操作人員的時(shí)間和樣品處理錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)，并提高通量。湖北FabRICATORIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶消化在1小時(shí)內(nèi)完成，且具有特異性。即使孵育時(shí)間延長(zhǎng)，也沒(méi)有過(guò)度消化的風(fēng)險(xiǎn)。

與IdeS不同，度拉糖肽由兩個(gè)胰高xue糖素樣肽-1 （GLP-1） 分子組成，它們通過(guò)柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區(qū)域。為了分別研究肽和 Fc 區(qū)域，從而鑒定結(jié)構(gòu)域特異性 PTM，用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時(shí)。為了降低樣品復(fù)雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對(duì)樣品的分析表明，使用GlySERIAS進(jìn)行連接子消化后，肽從Fc區(qū)域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點(diǎn)，這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測(cè)為幾種變體，其中不同數(shù)量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外，還鑒定了GLP-1肽的氧化。盡管GlySERIAS同時(shí)在多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化，但一式三份的酶解在獲得的不同F(xiàn)c/2變體的相對(duì)量中顯示出可重復(fù)的結(jié)果。

Genovis除了提供IdeS酶以外，還提供很多種特異性蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）。IgdE 在鉸鏈正上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人 IgG1，產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質(zhì)池。它在pH值和鹽濃度范圍內(nèi)具有活性，不需要任何還原劑或輔助因子。因此，與許多其他常用的蛋白酶相比，F(xiàn)abALACTICA不需要任何優(yōu)化來(lái)避免過(guò)度消化。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶，例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析、抗體高階結(jié)構(gòu)（HOS）的結(jié)晶和NMR研究、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價(jià)結(jié)合研究和完整的Fc聚糖分析。FabRICATOR（IdeS蛋白酶）的一大優(yōu)勢(shì)是速度！

Genovis是一家瑞典生物技術(shù)公司，自2010年起，為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨(dú)特、快速且易于使用的酶學(xué)工具，主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。我們?cè)谌蚍秶鷥?nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?，用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁(yè)面”獲得更多應(yīng)用信息，如果您有興趣，可以和我們一起做一個(gè)“SmartStories”，也可以聯(lián)系我們?？上q鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的 F（ab'）2 和 Fc 片段。云南IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。云南IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）試劑盒可消化兔 IgG，但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料，而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對(duì)處理兔IgG感興趣，請(qǐng)聯(lián)系Genovis團(tuán)隊(duì)，我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹(shù)脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡(jiǎn)單性、速度和可重復(fù)性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用。 QC方法需要執(zhí)行簡(jiǎn)單，易于訓(xùn)練，高度可重復(fù)，數(shù)據(jù)易于分析，這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因?yàn)樗m用于一系列不同的IgG，這也意味著使用FabRICATOR進(jìn)行QC工作的客戶(hù)將能夠在未來(lái)的產(chǎn)品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。云南IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)