福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

α連接的Genovis的GalNAcs的水解：GalNAcEXO 是一種 α-N-乙酰半乳糖胺苷酶，可有效水解糖蛋白上的末端 GalNAc 殘基。與絲氨酸或蘇氨酸連接的 GalNAc（稱為 Tn 抗原）被 GalNAcEXO 快速有效地水解，并且該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAcs 上顯示出活性。Genovis的GalNAcEXO 是一種外α-N-乙酰半乳糖胺酶，用于有效水解與糖蛋白（Tn 抗原）中的絲氨酸或蘇氨酸殘基相連的 α-N-乙酰半乳糖胺 （GalNAc）。該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAc 上顯示活性。GalNAcEXO 在天然條件下水解糖蛋白上的 GalNAc，在 pH 值 6.0 至 7.6 范圍內(nèi)具有高度活性。用SialEXO處理血清，上樣于GlycOCATCH，洗滌，洗脫O-糖基化蛋白。Swiss Prot 數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)列表。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達(dá)。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成，均帶有His標(biāo)簽，組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 單位小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率； 3. 適用于自動(dòng)化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！將混合物加載到GlycOCATCH上，洗滌樹脂，并用8M尿素洗脫結(jié)合的肽。純化后，在RP-LC-MS上分離樣品。數(shù)據(jù)顯示，糖苷酸肽的選擇性純化，攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集：IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。胰蛋白酶消化IgA后，將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上，并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預(yù)期的 O-糖基化鉸鏈肽富集，具有不同程度的糖基化。廣東PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成，每種唾液酸酶都具有獨(dú)特的活性，并且它們同時(shí)起作用。

與PNGase F類似，Genvois的OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖：糖基化往往是異質(zhì)的，這使得對(duì)高度糖基化的生物zhiliao藥物的分析具有挑戰(zhàn)性。完整質(zhì)量數(shù)的確認(rèn)以及其他產(chǎn)品質(zhì)量屬性的表征受到不同糖型復(fù)雜性的阻礙，這就是為什么有效的聚糖去除工具簡化了此類分析的原因。 雖然 N-聚糖包含一個(gè)共同的結(jié)構(gòu)，并且可以通過 PNGase F 整體去除，但粘蛋白型 O-聚糖在結(jié)構(gòu)上更加多樣化，具有多個(gè)不同的he心。OmniGLYZOR含有固定化酶的混合物，能夠依次分解O-聚糖，以完全去除最常見的O-聚糖結(jié)構(gòu)（二唾液酸和單唾液酸基he心1和Tn抗原）。

Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協(xié)同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區(qū)域O-聚糖位點(diǎn)的覆蓋率（圖3）。使用OpeRATOR鑒定對(duì)應(yīng)于所有13個(gè)O-聚糖位點(diǎn)的肽，而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個(gè)位點(diǎn)。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好，此處由 S186 和 T245 位點(diǎn)缺乏消化來表明。此外，ImpaRATOR 在兩個(gè)相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解，如 S213 位點(diǎn)酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點(diǎn)酶解肽的低強(qiáng)度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品（T184-S199和T200-H204;圖2b和d），而在ImpaRATOR消化的樣品中，具有漏裂的相應(yīng)肽（S184-H204）的強(qiáng)度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點(diǎn)覆蓋率，但使用ImpaRATOR進(jìn)行消化可以表征O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化物種。例如，條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應(yīng)該與使用OpeRATOR的消化進(jìn)行比較，在OpeRATOR中，必須去除唾液酸才能產(chǎn)生酶活性，這意味著有關(guān)唾液酸化的信息丟失?？偠灾?，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關(guān)聚糖組成和 O-聚糖位點(diǎn)的完整信息。OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。

Genvois的SialEXO產(chǎn)品是唾液酸酶，用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成，每種唾液酸酶都具有獨(dú)特的活性，并且它們同時(shí)起作用。一種酶對(duì)α2-3、α2-6和α2-8連接的唾液酸具有很好的活性，另一種酶（SialEXO 2-3）通過α2-3-鍵快速水解唾液酸。SialEXO凍干可在2小時(shí)內(nèi)去除天然蛋白質(zhì)上的所有唾液酸。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白，在pH值范圍為6.5至9時(shí)顯示出活性。這些酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達(dá)。兩種酶都含有 His 標(biāo)簽，酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。 兩種酶都含有 His 標(biāo)簽，酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

用于糖蛋白的去氟糖基化，而不會(huì)用酶污染z終制劑。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖：為了確認(rèn)依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù)，進(jìn)行了釋放的N-聚糖分析。標(biāo)記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失，如半乳糖基化聚糖物種的信號(hào)丟失所示。該酶是一種有價(jià)值的工具，可降低樣品異質(zhì)性，用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復(fù)雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc；2. 實(shí)現(xiàn)完全糖基去除，以改善蛋白質(zhì)表征；3. 可固定在即用型離心柱中。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶