本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明通過設(shè)計人字形微流控芯片，當(dāng)標本通過時形成各向異性流，***形成微渦流，使外泌體與抗體充分結(jié)合，克服常規(guī)微流控芯片平滑通道因混合不均致反應(yīng)不完全的弊端，用此平臺靶向外泌體膜表面的生物標記物gpc1，直接將外泌體從血漿中分離出來。與標準的外泌體分離方法(超速離心法)相比，本發(fā)明的裝置顯示出更高的特異性(4倍的差異)和相對簡潔的步驟(捕獲和釋放<20分鐘)，并且需要較小的樣品量(200μl)即可檢測到pc患者和健康人的gpc1外泌體含量的差異。附圖說明為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進行說明：圖1為外泌體分離微流控芯片實物圖。圖2為外泌體分離微流控芯片結(jié)構(gòu)圖(a：人字形微流控芯片平面設(shè)計圖；b：人字形微流控芯片立體設(shè)計圖；c：電鏡下的通道結(jié)構(gòu))；圖3為各向異性流示意圖；圖4為洗脫液驗證(a：外泌體捕獲原理(抗原抗體結(jié)合)；b：洗脫液和中和液的滴定曲線，在10：1的比例下，ph調(diào)節(jié)至；c：通過nta技術(shù)比較pbs和buffer洗脫液的外泌體分離效果。圖5為抗體濃度篩選結(jié)果(a：不同濃度抗體nta檢測結(jié)果；b：平滑通道與人字形通道比較結(jié)果；c：本發(fā)明方法與超速離心比較結(jié)果)。南京外泌體檢測服務(wù)公司，科研課題解決方案？江蘇高效液相色譜外泌體提取試劑
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為"exosome"。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、"運載物"和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為"exosome"?，F(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。折疊編輯本段構(gòu)成外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年，Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細胞分泌的exosome可以被人的肥大細胞捕獲。全自動高效液相色譜外泌體粒徑分析外泌體檢測服務(wù)-價格低-周期短-數(shù)據(jù)清晰。
《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法更新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。[1]六是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不范圍廣。人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當(dāng)其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合，進而***靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合，從而***細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后，其被認為是細胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型。
也不利于流體中的細胞、蛋白和外泌體與通道中的抗體結(jié)合。因此，急需一種特異性分離外泌體的芯片，高通量、體積小和操作簡單，為**早期及伴隨診斷提供工具。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種外泌體分離微流控芯片；本發(fā)明的目的之二在于提供利用所述外泌體分離微流控芯片捕獲外泌體的方法。為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：1、外泌體分離微流控芯片，所述芯片包括多個交錯人字型微混合器，每個shm的人字形凹槽呈周期性地交錯排列。推薦的，所述人字型微混合器每個循環(huán)周期由十個人字形的不對稱連續(xù)區(qū)域組成。推薦的，所述交錯人字型微混合器組成八個單獨的人字形微通道，八個人字形微通道通過集管與入口連接。推薦的，通道的總高度(h)50μm，凹槽的高度與通道的高度(α)的比率設(shè)定為；v字形和通道軸的夾角(θ)為45°，主波矢量q＝2π/100μm。2、利用所述外泌體分離微流控芯片捕獲外泌體的方法，包括如下步驟：在芯片通道內(nèi)包被捕獲抗體，加入體液樣本，用ph為～，收集洗脫液。推薦的，所述洗脫的緩沖液流速為80μl/min。推薦的，所述捕獲抗體的濃度為5～20μg/ml。推薦的，所述外泌體胰腺*血漿外泌體，包被抗體為gpc1抗體。翌科生物的外泌體檢測服務(wù),醫(yī)學(xué)實驗,醫(yī)學(xué)模型構(gòu)建做的怎么樣？誰知道？
4）臨床大樣本量驗證差異基因；5）外泌體功能檢測:·小室共培養(yǎng)研究外泌體功能·影響細胞功能研究（細胞增殖、凋亡、遷移、侵襲等）·機制研究（miRNA靶基因驗證、功能蛋白、信號通路、lncRNA等）6）動物研究。用于分離外泌體樣本類型及所需量：血清樣本：3-5ml血漿樣本：3-5ml無血清培養(yǎng)細胞上清：50-100ml體液：15-20ml外泌體單項實驗服務(wù)，歡迎來電/郵件垂詢：（1）外泌體抽提服務(wù)：超速離心獲得外泌體（2）外泌體粒徑檢測（3）透射電鏡檢測（4）westernblot檢測（蛋白標志物CD9/CD63/CD81/HSP70）（5）無外泌體血清（6）可以提供常規(guī)細胞培養(yǎng)服務(wù)，省去客戶培養(yǎng)細胞麻煩及采購去外泌體血清成本。（7）提供外泌體熒光標記：PKH67標記（綠色）或PKH26標記（紅色）。聯(lián)系人：劉經(jīng)理電話：手機：/(7:00-24:00。外泌體提取找哪個公司做比較好？高校專門做外泌體檢測
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外泌體(Exosome)一、外泌體簡介外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，密度在，具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括腫瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞（免疫細胞、神經(jīng)細胞、干細胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA，Exosome可通過細胞膜受體直接促進受體細胞，也可運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用，不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同，可作為多種疾病的早期診斷標記物，也能作為靶向藥物的載體進行疾病好質(zhì)。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子，它可以通過外泌體從一個地方轉(zhuǎn)運到另外一個地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達變化，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能。二、研究現(xiàn)狀1、外泌體研究的主要應(yīng)用外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、中劉侵襲等方方面面。江蘇高效液相色譜外泌體提取試劑
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