泰州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-01

    可用于需要低檢測(cè)限的測(cè)定具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速,簡單且均一的生物發(fā)光測(cè)定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基的使用兼容高斯熒光素酶近年來,其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),可通過氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),產(chǎn)***光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn):提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號(hào)在大量檢測(cè)板之間提供一致的信號(hào)與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑(Renillareniformis)分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,產(chǎn)生480nm的藍(lán)光。與螢火蟲螢光素酶類似。D-熒光素鉀鹽使用的注意事項(xiàng)。泰州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

    luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示:,在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),生成氧化熒光素(oxyluciferin),分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口,產(chǎn)品價(jià)格昂貴。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果。所以,需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn),一方面可以降低成本,一方面可以增強(qiáng)使用效果。作者:科遠(yuǎn)迪鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。D-luciferin,potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光,一般是將Fireflyluciferase基因(由554個(gè)氨基酸構(gòu)成,約50KD)即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶,培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,當(dāng)細(xì)胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)?;颉⒓?xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后,當(dāng)外源(腹腔或靜脈注射)給予其底物熒光素(D-luciferin,potassiumsalt,以下均簡稱熒光素),即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP,氧存在的條件下,催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。徐州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽哪家好做D-熒光素鉀鹽測(cè)試價(jià)格是多少。

    經(jīng)HE染色后觀察細(xì)胞的病理形態(tài)學(xué)?;铑}動(dòng)物成像技術(shù)是近期發(fā)展起來的一種新型穩(wěn)定可靠,是檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)分子及細(xì)胞事件的影像檢測(cè)技術(shù),強(qiáng)有力手段。利用生物發(fā)光成像(BLI)可以對(duì)活題病灶的大小進(jìn)行無損傷直觀準(zhǔn)確檢測(cè)。我們有自己的獨(dú)自有機(jī)合成實(shí)驗(yàn)室,可以生產(chǎn)合成各種化學(xué)發(fā)光試劑,我們可以提供化學(xué)發(fā)光試劑、化學(xué)發(fā)光底物、發(fā)光標(biāo)記物、發(fā)光增強(qiáng)劑、染料探針類、微生物和酶的顯色底物以及體外診斷試劑。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇丙的酮酸三(環(huán)已胺)鹽PEP0c835bf4-aae2-43c1-be81-e57液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PE。

    可用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)靈敏方便地測(cè)定熒光素酶基因的表達(dá)。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn):①非放射性;②比CAT及其他報(bào)告基因速度快;③比CAT靈敏100倍;④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí),在植物中的半衰期為3.5小時(shí)。由于半衰期短,故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變,而熒光素酶不會(huì)積累。相反,CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范圍內(nèi),熒光信號(hào)強(qiáng)度與酶濃度成正比。在理想條件下,可檢測(cè)到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測(cè)步驟:1.用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。2.設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段,將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒(pGL3-basic)中。3.篩選陽性克隆,測(cè)序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用。4.?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對(duì)照,提純備用。5.培養(yǎng)293(或其它目的細(xì)胞),并接種于24孔板中,生長10-24小時(shí)(80%匯合度)。6.將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7.提取蛋白并用于熒光素酶檢測(cè)。8.加入底物,測(cè)定熒光素酶的活性。9.計(jì)算相對(duì)熒光強(qiáng)度,并與空載對(duì)照比較。D-熒光素鉀鹽的合作平臺(tái)有哪些?

    我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測(cè)法。螢光素酶(英語:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有螢光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。螢光素或螢光素酶不是特定的分子。光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽使用說明

D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。泰州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

    8.取剩余裂解液測(cè)定LacZ的活性,其讀數(shù)作為內(nèi)標(biāo)用以矯正熒光素酶的讀數(shù)。9.用矯正后的讀數(shù)作圖,分析數(shù)據(jù)。注:熒光素見光易氧化,已稀釋未用的熒光素應(yīng)丟棄。注意事項(xiàng):1.熒光素酶檢測(cè)試劑需在15-25℃條件下預(yù)平衡后再進(jìn)行反應(yīng),而后依據(jù)具體條件進(jìn)行自動(dòng)或手動(dòng)檢測(cè)。當(dāng)用液閃計(jì)數(shù)儀時(shí),加入熒光素酶檢測(cè)試劑后立即輕輕混勻。2.如果細(xì)胞裂解后不能立即對(duì)提取物進(jìn)行檢測(cè),樣品可以在冰上保存大約5h,在-70℃可保存數(shù)月。不要反復(fù)凍融以避免酶活性的降低。3.利用上述方法檢測(cè)冷的樣品時(shí),其信號(hào)強(qiáng)度將下降5-15%。4.在熒光素酶活性較高的情況下,導(dǎo)致信號(hào)超出線性范圍(信號(hào)溢出)可用裂解液將樣品進(jìn)行稀釋。5.不要儲(chǔ)存稀釋過的樣品。如果必須保存,要在稀釋的樣品中加入BSA至終濃度為,這樣可以保持樣品的穩(wěn)定性。6.一些熒光儀在進(jìn)行檢測(cè)前需要1-2s的穩(wěn)定,因此建議在開機(jī)后過一段時(shí)間再進(jìn)行檢測(cè)操作。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)主要有哪些用途?a.啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析,將啟動(dòng)子區(qū)域序列(通常2k左右)進(jìn)行分段截短,或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變,再分別構(gòu)建入luciferase報(bào)告載體,檢測(cè)其啟動(dòng)子活性。b.啟動(dòng)子SNP分析,一些基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性。泰州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

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