隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新，保持技術(shù)帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)（LAR）Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報告基因一起，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展。此外，pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個改造一種報告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報告基因上，通過生物信息學(xué)和合成方法，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵。此后。D-熒光素鉀鹽的測試方法有哪幾種？熒光試劑
常見的熒光素酶有兩種，分別是螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase，編碼基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長不同），當(dāng)?shù)孜镞^量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。***成像技術(shù)（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù)，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學(xué)發(fā)光的原理，將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動物體內(nèi)，與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng)，利用光學(xué)系統(tǒng)檢測光強(qiáng)度，間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位。這項技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個領(lǐng)域常用的有**或疾病動物模型的建立，并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究、干細(xì)胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin（D熒光素）的分類：D-Luciferin：有三種，分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素。宿遷D-熒光素鉀鹽應(yīng)用D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司怎么樣？
從而實(shí)時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）***用于報告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）配制成100mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配制工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留。4）圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強(qiáng)信號）。D-熒光素鉀鹽注：螢光素、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶、螢光素鉀鹽、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶、螢火蟲熒光素酶、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用無菌的DPBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。
Q：熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時具有更寬的動態(tài)范圍，便于數(shù)值分析比較，不需要熒光顯微鏡，而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時由于沒有內(nèi)源活性、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進(jìn)行失蹤定位，并且其觀測不需裂解細(xì)胞，方便進(jìn)行適時觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對活性如何？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q：雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個方面改善，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞，另外陽性對照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗(yàn)證。這個實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果很靈敏，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個數(shù)量級之內(nèi)即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性。做D-熒光素鉀鹽測試哪個公司好？
并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo)，這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外，還可以檢測底物（luciferin）濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián)，能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊的建立，一種改進(jìn)的luciferin面世，能更好地用于典型的報告基因檢測應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin，是新型底物開發(fā)的一個早期實(shí)例。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn)，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計出一種新型螢光素酶報告基因，即NanoLuc?螢光素酶。D-熒光素鉀鹽適用于哪些領(lǐng)域？常州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽生物公司
D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長？熒光試劑
而是對于所有能夠產(chǎn)生螢光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng)。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲，含有多種不同的螢光素酶，能夠催化同一螢光素底物，而發(fā)出不同顏色的螢光。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的螢光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用。如今研究得**透徹的螢光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）。[1]螢光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成，并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn)。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段，可以對整個動物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）螢光素酶。熒光試劑