珠海實(shí)時(shí)光纖成像記錄技術(shù)方案

在體光纖成像記錄直接標(biāo)記法不涉及細(xì)胞的遺傳修飾，標(biāo)價(jià)能夠在體外培養(yǎng)時(shí)主動(dòng)與細(xì)胞結(jié)合，也可以將標(biāo)記直接注射到動(dòng)物體內(nèi)，間接標(biāo)記法，將報(bào)告基因引入細(xì)胞，并翻譯成酶、受體、熒光或生物發(fā)光蛋白如果報(bào)告基因的表達(dá)是穩(wěn)定的，標(biāo)記的細(xì)胞可以在整個(gè)細(xì)胞的生命周期中被觀察到。由于報(bào)告基因通常被傳遞給后代細(xì)胞，因此細(xì)胞增殖也能夠得到體現(xiàn)。體內(nèi)標(biāo)記是指將探針直接注射進(jìn)入機(jī)體，常用的標(biāo)記方法是靜脈注射氧化鐵納米顆粒。光學(xué)成像方法可分為基于熒光的方法和基于生物發(fā)光的方法。偏振是實(shí)現(xiàn)在體光纖成像記錄的關(guān)鍵特性之一。珠海實(shí)時(shí)光纖成像記錄技術(shù)方案

在體光纖成像記錄和傳統(tǒng)的體外成像或細(xì)胞培養(yǎng)相比有著明顯優(yōu)點(diǎn)。首先，在體光纖成像記錄能夠反映細(xì)胞或基因表達(dá)的空間和時(shí)間分布，從而了解活的物體動(dòng)物體內(nèi)的相關(guān)生物學(xué)過(guò)程、特異性基因功能和相互作用。由于可以對(duì)同一個(gè)研究個(gè)體進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)查看成像，既可以進(jìn)步數(shù)據(jù)的可比性，避免個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的可影響，又不需要?dú)⑺滥Ｊ絼?dòng)物，節(jié)省了大筆科研用度。第三，尤其在藥物開發(fā)方面，在體光纖成像記錄更是具有劃時(shí)代的意義。根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，由于進(jìn)進(jìn)臨床研究的藥物中大部分由于安全題目而終止，導(dǎo)致了在臨床研究中大量的資金浪費(fèi)。在體實(shí)時(shí)影像光纖方案在體光纖成像記錄都需要光學(xué)技術(shù)配合生物樣本的特性發(fā)展。

目前大部分高水平的文章還是應(yīng)用生物發(fā)光的方法來(lái)研究活的物體動(dòng)物體內(nèi)成像。但是，熒光成像有其方便，直觀，標(biāo)記靶點(diǎn)多樣和易于被大多數(shù)研究人員接受的優(yōu)點(diǎn)，在一些植物分子生物學(xué)研究和觀察小分子體內(nèi)代謝方面也得到應(yīng)用。對(duì)于不同的研究，可根據(jù)兩者的特點(diǎn)以及實(shí)驗(yàn)要求，選擇合適的方法。例如利用綠色熒光蛋白和熒光素酶對(duì)細(xì)胞或動(dòng)物進(jìn)行雙重標(biāo)記，用成熟的在體光纖成像記錄進(jìn)行體外檢測(cè)，進(jìn)行分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究，然后利用生物發(fā)光技術(shù)進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)檢測(cè)，進(jìn)行活的物體動(dòng)物體內(nèi)研究。

在體光纖成像記錄，指的是利用光學(xué)的探測(cè)手段結(jié)合光學(xué)探測(cè)分子對(duì)細(xì)胞或者組織甚至生物體進(jìn)行成像，來(lái)獲得其中的生物學(xué)信息的方法。傳統(tǒng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法需要在不同的時(shí)間點(diǎn)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以獲得多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。而在體光纖成像記錄則可以對(duì)同一觀察目標(biāo)進(jìn)行連續(xù)的查看并記錄其變化，從而達(dá)到簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)的目的。光在體內(nèi)組織中傳播時(shí)會(huì)被散射和吸收，血紅蛋白吸收可見光中藍(lán)綠光波段的大部分，但是波長(zhǎng)大于600nm的紅光波段無(wú)法被其吸收，可以穿過(guò)組織和皮膚被檢測(cè)到。在相同的深度情況下，檢測(cè)到的發(fā)光強(qiáng)度和細(xì)胞數(shù)量具有線性關(guān)系。光源的發(fā)光強(qiáng)度隨深度增加而衰減，血液豐富的組織/系統(tǒng)衰減多，與骨骼相鄰的組織/系統(tǒng)衰減少。在體光纖成像記錄待成像物體所處環(huán)境為血管，支氣管。

在體光纖成像記錄的目的是實(shí)時(shí)檢測(cè)細(xì)胞的活性變化?；阝}離子濃度變化的熒光成像技術(shù)被較多用來(lái)記錄神經(jīng)元活性。在體光纖記錄方法與傳統(tǒng)的在體電生理記錄方法有著不同的特點(diǎn)，光纖記錄因其穩(wěn)定、方便、易上手而應(yīng)用較多。首先，將熒光蛋白表達(dá)在特定類型的神經(jīng)元中，光纖記錄可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞類型特異性的活性檢測(cè)，而用電生理記錄的方法記錄特定類型的神經(jīng)元的活性比較困難。其次，電生理記錄容易受到環(huán)境中的電信號(hào)以及動(dòng)物的行為動(dòng)作影響，而光纖記錄相對(duì)來(lái)說(shuō)有著較強(qiáng)的抗干擾性能。然后，光纖記錄相對(duì)穩(wěn)定，可以很容易實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)程的活性檢測(cè)，例如動(dòng)物的整個(gè)學(xué)習(xí)過(guò)程，而利用電生理記錄實(shí)現(xiàn)起來(lái)則相對(duì)困難。較后，光纖記錄用神經(jīng)元群體的熒光強(qiáng)度變化來(lái)表征神經(jīng)元整體的活性變化，不能反映單個(gè)神經(jīng)元的活性，而電生理記錄則能夠檢測(cè)到單個(gè)神經(jīng)元的活性，具有更高的空間分辨率。在體光纖成像記錄整機(jī)一體化，輕巧便攜。珠海實(shí)時(shí)光纖成像記錄技術(shù)方案

在體光纖成像記錄為一項(xiàng)新興的分子、 基因表達(dá)的分析 檢測(cè)技術(shù)。珠海實(shí)時(shí)光纖成像記錄技術(shù)方案

小動(dòng)物在體光纖成像記錄圖像處理軟件除了提供含有光子強(qiáng)度標(biāo)尺的成像圖片外，還能計(jì)算分析發(fā)光面積、總光子數(shù)、光子強(qiáng)度的相關(guān)參數(shù)供實(shí)驗(yàn)者參考。原則上，如預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)拍攝出圖片非特異性雜點(diǎn)多，需降低曝光時(shí)間；反之，如信號(hào)過(guò)弱可適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間。但曝光時(shí)間的延長(zhǎng)，不單增加了目的信號(hào)，對(duì)于背景噪音也存在一個(gè)放大效應(yīng)。同一批實(shí)驗(yàn)應(yīng)保持一致的曝光時(shí)間，同時(shí)還應(yīng)保持標(biāo)本相對(duì)位置和形態(tài)的一致，從而減少實(shí)驗(yàn)誤差。進(jìn)行熒光成像時(shí)，實(shí)驗(yàn)者可選擇背景熒光低不容易反光的黑紙放在動(dòng)物標(biāo)本身下，減少金屬載物臺(tái)的反射干擾。珠海實(shí)時(shí)光纖成像記錄技術(shù)方案