怎么做外泌體

外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具，可以通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)**的增殖，血管新生和**轉(zhuǎn)移。與病毒***，幫助病毒逃避免疫關(guān)系很大，并與心血管疾病，老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。由于外泌體直徑小，樣本含量低，提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止，仍沒(méi)有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量、純度以及生物活性。英瀚斯生物專(zhuān)業(yè)做外泌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)?？蒲袑?shí)驗(yàn)的外泌體檢測(cè)服務(wù)介紹。怎么做外泌體

外泌體的生成，微泡是由質(zhì)膜的出芽形成的，膜雙層通過(guò)磷脂的不對(duì)稱(chēng)分布來(lái)維持脂質(zhì)的“多面性”。外層富含磷脂酰膽堿和鞘磷脂，而內(nèi)層主要由磷脂酰絲氨酸和磷脂酰乙醇胺形成。然而，胞質(zhì)Ca2+的內(nèi)流可以破壞這種不對(duì)稱(chēng)性，導(dǎo)致磷脂跨膜雙層的重新分配，促進(jìn)膜起泡。依賴(lài)Ca2+的蛋白水解同時(shí)降解膜相關(guān)的細(xì)胞骨架，促進(jìn)出芽過(guò)程。在外泌體形成過(guò)程中，首先，MVE(多囊體)向內(nèi)芽形成小泡，內(nèi)含來(lái)自細(xì)胞質(zhì)的貨物(蛋白質(zhì)、mRNA和miRNAs)。然后，MVE要么與細(xì)胞膜融合釋放外泌體(內(nèi)囊泡)，要么與溶酶體融合降解MVE含量。到達(dá)目的地后，外泌體通過(guò)內(nèi)吞途徑或與靶細(xì)胞膜融合，將其內(nèi)容物釋放到細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞的膜的囊泡也可以直接從細(xì)胞膜上萌發(fā)，攜帶活性蛋白、RNA和其他化合物。江西專(zhuān)業(yè)的外泌體外泌體的產(chǎn)生過(guò)程，南京英瀚斯生物。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取比較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心，這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí)，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。五是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度比較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法比較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體

外泌體（Exosome）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；外泌體攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、RNA等重要信息，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院李偉華等人在MolecularCancer雜志發(fā)表的有關(guān)外泌體研究的綜述：分別介紹了1、外泌體在慢性乙型肝炎至肝細(xì)胞*過(guò)程中的作用2、外泌體與肝細(xì)胞*的關(guān)系3、外泌體在肝*診斷和預(yù)后中的應(yīng)用4、外泌體在肝****中的應(yīng)用，對(duì)相關(guān)涉及的***研究?jī)?nèi)容進(jìn)行總結(jié)以揭示外泌體在肝*的發(fā)***展，診斷和***中的重要性，為研究人員進(jìn)一步闡明外泌體在肝*中的作用機(jī)制，并促進(jìn)外泌體在臨床診斷中的應(yīng)用和肝*的***提供參考。外泌體提取，超離法是比較常用的外泌體純化手段。

外泌體研究界比較家喻戶(hù)曉的就是大牛Thery C了，想當(dāng)年一篇外泌體超速離心提取方法的文章已經(jīng)是成為了眾多外泌體研究者的“圣經(jīng)”了（Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids，2006）。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，大牛Thery C實(shí)驗(yàn)室已發(fā)表外泌體相關(guān)paper四五十篇，其中大多數(shù)為綜述性文章，實(shí)驗(yàn)性文章有約12篇。英瀚斯生物，多年從事科研課題實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，經(jīng)常設(shè)計(jì)外泌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)項(xiàng)目，各類(lèi)外泌體測(cè)序、檢測(cè)、電鏡等外泌體存在于人類(lèi)或動(dòng)物的各種體液中。江西專(zhuān)業(yè)的外泌體

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外泌體由細(xì)胞在正常和病理?xiàng)l件下釋放。攜帶幾種類(lèi)型的貨物分子,如核酸和蛋白質(zhì),因此,被認(rèn)為是至關(guān)重要的生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)對(duì)于臨床診斷。載有腫瘤特異性RNA的外泌體被用作**診斷的生物標(biāo)志物，外泌體蛋白被認(rèn)為是多種疾病的潛在生物標(biāo)志物，包括**、肝臟疾病和腎臟疾病。它們含有多種生物標(biāo)志物，如TSG101、帶電荷的多泡體蛋白2a(CHMP2A)、RAS相關(guān)蛋白R(shí)abb-11b(RAB11B)、CD63和CD81蛋白和脂類(lèi)，包括膽固醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺和磷脂酰絲氨酸。外泌體的大分子成分在細(xì)胞功能和病理狀態(tài)中發(fā)揮重要作用，如炎癥、免疫反應(yīng)、血管生成、細(xì)胞死亡、神經(jīng)退行性疾病和**。怎么做外泌體