免疫組化的結(jié)果分析:
免疫組化實(shí)驗(yàn)通常需要設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照(或替代對(duì)照)(陽(yáng)性對(duì)照是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無(wú)問(wèn)題;陰性對(duì)照與替代對(duì)照是排除有無(wú)非特異性染色)。一般情況下,陽(yáng)性對(duì)照顏色的特點(diǎn)為:Ag定位,包漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。且染色的強(qiáng)度不同(顏色深淺不一);陰性對(duì)照的特點(diǎn)為:染色細(xì)胞與組織無(wú)區(qū)別,顏色具有彌散性,分布均勻。
英瀚斯生物可承接各類(lèi)病理染色,包括免疫組化。
說(shuō)明:免疫組化實(shí)驗(yàn)可以對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析,但要實(shí)驗(yàn)得到的必須是高質(zhì)量的染色切片,要求背景染色淺且特異性染色較深,這樣分析的結(jié)果才會(huì)比較準(zhǔn)確。 病理報(bào)告中的免疫組化到底有什么作用?寧夏免疫組化多少錢(qián)
免疫組化的局限性:在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來(lái)越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在病理診斷和醫(yī)療中已有了很重要的位置,對(duì)于cancer診斷、鑒別診斷、分類(lèi)及諸多方面產(chǎn)生了重大的影響。但是免疫組化技術(shù)還存在著缺陷和不足,作為病理醫(yī)生和病理技術(shù)人員不僅要充分認(rèn)識(shí)到缺陷和不足,而且要努力避免由于缺陷和不足給診斷帶來(lái)的誤區(qū),這就要求病理醫(yī)生和病理技術(shù)人員在工作中不斷學(xué)習(xí)與研究,在實(shí)際操作中總結(jié)經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn),分析失敗原因,努力實(shí)現(xiàn)操作規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理診斷及鑒別診斷、臨床醫(yī)療中的指導(dǎo)作用。寧夏免疫組化多少錢(qián)臨床樣本檢測(cè),免疫組化,英瀚斯生物專(zhuān)業(yè)病理。
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體
免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后,從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清,是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
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免疫組化常用的染色方法
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。
免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標(biāo)記的切片均呈陰性,無(wú)陽(yáng)性信號(hào),假陰性結(jié)果不是真實(shí)的反應(yīng)。導(dǎo)致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復(fù)方法選擇不當(dāng),根據(jù)不同的抗原特點(diǎn)采用不同的修復(fù)方法,大多數(shù)抗體要求熱修復(fù),熱修復(fù)又包括高壓修復(fù)、微波修復(fù)及煮沸熱修復(fù);而對(duì)某些細(xì)胞內(nèi)抗原和細(xì)胞間質(zhì)抗原需要用酶消化,如表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin則不用修復(fù);(2)一抗本身的問(wèn)題:一抗效價(jià)降低或失效。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)診或漏診,進(jìn)而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問(wèn)題的可通過(guò)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照,比較兩者染色結(jié)果。若陽(yáng)性對(duì)照有表達(dá),表明試劑和染色體系及實(shí)驗(yàn)步驟均無(wú)問(wèn)題;若陽(yáng)性對(duì)照無(wú)表達(dá),則檢測(cè)過(guò)程中某一試劑或某個(gè)步驟存在問(wèn)題,應(yīng)逐一查找原因。關(guān)于免疫組化的常見(jiàn)問(wèn)題匯總。
確定cancer分期,免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床可以進(jìn)行處理哦,英瀚斯生物為您處理。cancer分期是判斷預(yù)后的一個(gè)指標(biāo),與是否浸潤(rùn)、有無(wú)淋巴管或血管侵襲密切相關(guān),而通過(guò)免疫組化方法可以判斷cancer是否浸潤(rùn)、有無(wú)淋巴管或血管侵襲。層黏連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可以清楚的顯示基膜的主要成分,用于區(qū)分原位*和浸潤(rùn)*,一旦上皮性*突破基膜為浸潤(rùn),未突破基膜為原位;顯示血管和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物第八因子相關(guān)蛋白、D2-40等則可清楚顯示cancer對(duì)血管或淋巴管的浸潤(rùn)。因此對(duì)許多cancer的良惡性鑒別及有無(wú)血管或淋巴管浸潤(rùn),免疫組化結(jié)果作為主要的鑒別依據(jù)。大鼠、小鼠組織免疫組化,找英瀚斯生物。貴州組織免疫組化
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免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹:
英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟:
1、SP三步法
1)石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。
2)0.3%或3%H2O2去離子水(無(wú)色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。
3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘
4)候選步驟:采用抗原修復(fù):微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次.
5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來(lái)源一致。傾去,勿洗。
6)滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過(guò)夜(比較好復(fù)溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。
7)滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
8)PBS沖洗,3分鐘×5次。
9)滴加SP(鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶),室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
10)PBS沖洗,3分鐘×5次。
11)顯色劑顯色(DAB等)。
12)自來(lái)水充分沖洗。
13)可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。
14)選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?寧夏免疫組化多少錢(qián)