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免疫組化的質(zhì)量控制免疫組化的質(zhì)量控制是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性和重復(fù)性的關(guān)鍵步驟。質(zhì)量控制包括實(shí)驗(yàn)前的抗體驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)中的陽性對照和陰性對照,以及實(shí)驗(yàn)后的結(jié)果評估??贵w驗(yàn)證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗(yàn)證抗體的特異性和靈敏度。陽性對照是使用已知表達(dá)目標(biāo)蛋白的組織或細(xì)胞,確保實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的有效性。陰性對照是使用不表達(dá)目標(biāo)蛋白的組織或細(xì)胞,排除非特異性結(jié)合。結(jié)果評估是通過圖像分析軟件對顯色結(jié)果進(jìn)行定量評估,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。英瀚斯生物,可做免疫組化定量分析。湖南免疫組化實(shí)驗(yàn)
免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色?
(1)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。
(3)內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過延長滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;
做病理染色,就找英瀚斯,專業(yè)團(tuán)隊(duì)支持。
(4)非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果;
(5)縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等;
(6)適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要;
(7)防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。 貴州組織免疫組化怎么選擇免疫組化公司哪家好?
免疫組化在臨床應(yīng)用中,還能及時(shí)準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶。英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),一站式醫(yī)學(xué)科研平臺。采用常規(guī)病理方法難以檢出的實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移稱為微小轉(zhuǎn)移灶。在常規(guī)組織切片中,辨別單個(gè)或幾個(gè)轉(zhuǎn)移性cancer細(xì)胞很難,淋巴結(jié)內(nèi)竇性組織細(xì)胞增生與某些cancer的早期轉(zhuǎn)移有時(shí)也不易區(qū)別,而采用免疫組化方法,有助于及時(shí)準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)微小(cancer)轉(zhuǎn)移灶。對乳腺cancer而言主要是腋窩淋巴結(jié)的檢測,淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者預(yù)后差,這對進(jìn)一步醫(yī)療和預(yù)后判斷十分有意義。
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體
免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
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免疫組化常用的染色方法
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。 英瀚斯生物做免疫組化怎么樣?
在臨床應(yīng)用中,免疫組化還可以進(jìn)一步分類不同qi官與組織交界處cancer。由于重疊的特征,在一些組織qi官交界處的cancer,只憑組織學(xué)基礎(chǔ)對cancer進(jìn)行分類很困難。如胃腸道梭形細(xì)胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,是間質(zhì)起源的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST),還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細(xì)胞cancer,兩者較難區(qū)別,且醫(yī)療與預(yù)后明顯的不同,但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細(xì)胞cancer,而角蛋白陽性則為胚胎cancer。免疫組化失敗的原因?安徽做得好的免疫組化怎么樣
常見的免疫組化方法有哪些?湖南免疫組化實(shí)驗(yàn)
免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片?
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是***我向一老師請教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩(wěn)定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時(shí),目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
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