武漢進口血清供應商

細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎？如何處理？一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：細胞生長過老，破碎的細胞殘??；血清質(zhì)量不好，反復凍融的結(jié)果；配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長；配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點；培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。血清的主要作用是提供促接觸和生長因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。武漢進口血清供應商

胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血；新生牛血清：出生12-24小時新生牛靜脈;又可細分為：a.高級新生牛血清：后靜置自然析出的血清;b.標準新生牛血清：c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清；小牛血清：出生三月齡小牛動脈分離血清；血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但仍存在一些問題。胎牛血清是品質(zhì)較為高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分較為少。武漢進口血清供應商將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。

非正規(guī)胎牛血清的產(chǎn)品會存在很多的問題：疫區(qū)來源，無合格質(zhì)檢使胎牛血清存在生物學污染：支原體、噬菌體、病毒、原蟲等，會直接影響實驗的結(jié)果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范，導致采集的原血放置時間過長或操作不當導致溶血，血液中血細胞裂解，血清顏色呈紅色或暗紅色，這樣的血清含有許多胞內(nèi)產(chǎn)物，里面很多物質(zhì)都會對細胞有刺激作用，影響實驗的穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)的真實性。血清批次不穩(wěn)定，添加來補？很多不法商販拿到低廉的疫區(qū)原料血清進行加工生產(chǎn)，為了保障血清的培養(yǎng)效果會對血清進行處理，較為常見的是添加、轉(zhuǎn)鐵蛋白、BSA、生長因子等，還有的會和新生牛血清、培養(yǎng)基等勾兌，更有甚者用的根本就不是牛血清，此類操作對所有生物學實驗都有巨大的影響。

血清的安全風險因素主要有以下方面：地理因素，地理因素包括血清產(chǎn)地的流行病學趨勢、基礎設施情況以及血源供應量。措施得當可以預防能避免的動物疾病，同時產(chǎn)地國穩(wěn)定可靠的基礎設施，對保證供應鏈的安全也十分必要。血源是否充足則決定了血清是否可源源不斷地持續(xù)供應。生產(chǎn)，生產(chǎn)遵循cGMP指南，則可保證血清質(zhì)量，降低有關(guān)無菌過濾、摻加和標簽錯誤的風險。cGMP為現(xiàn)場審核的開展提供了框架。生產(chǎn)過程中對血清進行有效的無菌過濾也是十分重要的。產(chǎn)品質(zhì)控，有效的無菌過濾使得細菌污染的風險很低。對于支原體和病毒篩查，一些相關(guān)規(guī)范內(nèi)部存在一定的方法靈活性，這使得采取不同方法進行支原體和病毒篩查成為可能，并且有時使得要篩查的病毒種類無需太多。有效輻照，要進一步降低外源因子風險，可對血清進行輻照(25–40 kGy)。但輻照并不能保證病毒污染的完全去除。輻照過量會導致FBS效能下降。新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛。

胎牛血清是細胞培養(yǎng)重要的培養(yǎng)基且不可替代，它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段，血中含有豐富的生長發(fā)育因子，非常適合各種細胞的培養(yǎng)。因此，如何在使用過程中保護這些因子的活性，達到較為大的細胞培養(yǎng)效果，就需要正確地使用胎牛血清。正確地使用胎牛血清可分為以下四個方面：正確儲存，避免反復凍融：血清在-20°C凍存。血清避免反復凍融，以免降低因子活性。如一次用不完，應進行分裝。血清和培養(yǎng)基應盡可能“現(xiàn)用現(xiàn)配”，配好的培養(yǎng)液，應于一周內(nèi)用完。血清避免在4°C或更高溫度靜置過久，否則會破壞血清中有效活性成分，影響血清品質(zhì)。胎牛血清的細菌內(nèi)有毒的 ≤5（EU/ml）；牛腹瀉病毒：陰性；大腸桿菌噬菌體：陰性。武漢進口血清供應商

血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝醫(yī)治中起重要作用。武漢進口血清供應商

血清為何要熱滅活，有必要對所有血清都滅活嗎？如何正確的進行滅活？加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細胞和巨噬細胞活化。在免疫學研究中，培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅清。實驗顯示，熱滅清對大多數(shù)的細胞而言是不需要的，對于非必須的細胞來說血清滅活對于細胞生長只有微小甚至無任何作用，還可能造成生長速率降低，沉淀物還會明顯增多，不利于細胞觀察。因此，若非必須，不需要對血清進行滅活處理。將需要進行處理的血清置于56℃水浴30min，建議加放空白對照（同體積水）使用溫度計測溫，以測得溫度為56℃時為計時起始點，加熱中可不時輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。武漢進口血清供應商

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