蕪湖藥理學膜片鉗全細胞記錄網站

膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性(1)光能應用于懸浮細胞的紀錄，因此大部分的紀錄對象為化細胞，而對于需要貼壁生長的大多數正常細胞，現有的自動膜片鉗系統(tǒng)就無法紀錄；(2)在紀錄對象上，目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀錄胞膜形狀平整飽滿的細胞，大部分是工具細胞如化細胞，此類細胞有比較強的細胞膜可以禁得起各種人為操作，而許多具有研究價值的細胞(例如元代培養(yǎng)的神經元)胞膜較弱容易破裂，且胞體表面不規(guī)整，現有的自動膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場。膜片鉗使用的注意事項：向玻璃微電極灌注內液時切勿灌太多，以防液體進入銀絲底部增加噪聲。蕪湖藥理學膜片鉗全細胞記錄網站

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當的負壓用電極的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入，如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接，它的電阻能夠達到數個或數十個千兆歐，這世界上就是在化學上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分，通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關聯(lián)。寧波細胞生物學膜片鉗實驗應用膜片鉗使用的注意事項：換液時應時刻觀察浴槽，防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。

膜片鉗技術的基本原理和方法：膜片鉗使用的基本方法是，把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下，與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接，導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ），只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制，從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術實現的關鍵是建立高阻抗封接，并能通過特定的記錄 儀器 反映這些變化。

膜片鉗技術在通道研究中的重要作用：1.與藥物作用有關的心肌離子通道：心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。近年來，國外學者在人類心肌細胞離子通道特性的研究中取得了許多進展，使得心肌藥理學實驗由動物細胞模型向人心肌細胞成為可能。2.對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究：通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究，了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標：外灌流時間常數：~200ms；內灌流時間常數：~2s。

膜片鉗實驗難度大、技術要求高，要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事，但要從一大批的實驗數據中，經過處理和分析，得出有意義、有價值的結果和結論，就顯得不那么容易，有許多需要注意和考慮的問題，包括減少噪音，避免電極前端的污染，提高封接成功率，具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式，為記錄特定離子電流如何選擇電極內、外液，如何選擇阻斷劑、激動劑，如何進行正確的數據采集等許多更為復雜的問題，還需在科研實踐中不斷地探索和解決。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標：軟件的功能全部，可按照操作者設定的參數方案自動執(zhí)行實驗。嘉興醫(yī)學膜片鉗技術研究方案

膜片鉗技術的應用范圍：對離子通道生理與病理作用機制的研究。蕪湖藥理學膜片鉗全細胞記錄網站

膜片鉗技術操作方法：實驗前準備:打開總電源及穩(wěn)壓電源，打開電腦、放大器，并開啟程序軟件，新建數據文檔并準備開始試驗;用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺的減震效果，打開倒置顯微鏡，監(jiān)視器和微操備用，取-血細胞將其中玻片取出放入小培美血中，置于倒置顯微鏡下，于低倍鏡下尋找狀態(tài)良好的細胞，并轉入高倍鏡下再次確認細胞狀態(tài)及貼壁情況等，確認細胞后，取電極一根充灌電極內液，彈出氣泡，然后套入銀絲并插入探頭中扭緊旋鈕，用注射器管道給電極一點點正壓，將電極入水，入水后，查案入水電阻，要在4-8M左右的電極才可以使用，通過調節(jié)微操，使電極不斷向下接近細胞，待電極尖銳端逐漸變清晰并且將要接近細胞時停止向下，然后把電極移到細胞上方調節(jié)放大器上的調零旋鈕以保證基線在零水平。蕪湖藥理學膜片鉗全細胞記錄網站

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