蕪湖神經(jīng)生物學(xué)實(shí)用膜片鉗設(shè)計(jì)公司

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-06-03

膜片鉗在通道研究中的重要作用:用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時(shí)程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時(shí)可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對(duì)離子通道開閉及通道電流的影響等。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。蕪湖神經(jīng)生物學(xué)實(shí)用膜片鉗設(shè)計(jì)公司

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膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析處理。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接。金華神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道研究。

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膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:1)細(xì)胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片鉗的基本方式,其它方式由此衍生。這種膜片形式比較穩(wěn)定因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,故對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和環(huán)境干擾比較小。但這種膜片形式易在電極形成囊泡,從而細(xì)胞骨架可能有所變化。另外這種膜片不能控制細(xì)胞內(nèi)成分。且任何影響膜電位的處理均可影響其電位水平。2)內(nèi)面向外式膜片( inside outpatch)細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細(xì)胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對(duì)通道活動(dòng)的影響。

膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學(xué)上分隔和電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域(膜片)以及其周圍,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,對(duì)這膜片上的離子通道的離子電流(pA級(jí))進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄的方法。測(cè)量回路的中心部分是使用場(chǎng)效應(yīng)管運(yùn)算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器。當(dāng)場(chǎng)效應(yīng)管運(yùn)算放大器的正負(fù)輸入端子是等電位,向正輸入端子施加指令電位時(shí),因?yàn)槎搪坟?fù)端子以及膜片都可等電位地達(dá)到鉗制的作用,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時(shí),其間達(dá)到很小的分流電流。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對(duì)藥物作用機(jī)制的研究。

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膜片鉗使用的注意事項(xiàng):1.為了防止塵埃、靜電傷害機(jī)器,每天做實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)用清水拖地。2.拉制儀使用前需預(yù)熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時(shí),請(qǐng)先用砂紙輕微打磨,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器,后開軟件;先關(guān)軟件,后關(guān)放大器。5.非必須用到汞燈時(shí)請(qǐng)不要打開汞燈電源,打開后至少需1個(gè)小時(shí)才可關(guān)閉。6.在放大器打開時(shí)不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲(包括地線),在取放細(xì)胞片時(shí)請(qǐng)關(guān)閉放大器。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí),因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):外灌流時(shí)間常數(shù):~200ms;內(nèi)灌流時(shí)間常數(shù):~2s。徐州細(xì)胞生物學(xué)腦定位膜片鉗應(yīng)用

膜片鉗使用操作注意:封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。蕪湖神經(jīng)生物學(xué)實(shí)用膜片鉗設(shè)計(jì)公司

膜片鉗記錄的幾種形式:細(xì)胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上,形成高阻封接,在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜,既而通過微管電極對(duì)膜片進(jìn)行電壓鉗制,高分辨測(cè)量膜電流,稱為細(xì)胞貼附膜片。由于不破壞細(xì)胞的完整性,這種方式又稱為細(xì)胞膜上的膜片記錄。此時(shí)跨膜電位由玻管固定電位和細(xì)胞電位決定。因此,為測(cè)定膜片兩側(cè)的電位,需測(cè)定細(xì)胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動(dòng)看,這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,所受的干擾小。蕪湖神經(jīng)生物學(xué)實(shí)用膜片鉗設(shè)計(jì)公司

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