x @ -FAgo過(guò)濾器(或等效過(guò)濾器)建議在保溫瓶和真空源之間使用,例如o保護(hù)真空源免受污染?!駥⒄婵掌窟B接到真空源的真空管●前肢●封閉劑,例如脫脂/低脂干奶(0.5%以下),酪蛋白,牛血清白蛋白(BSA)或其他市售的封閉劑,例如blok * -CH緩沖液(請(qǐng)參閱表5)抗體(單克隆和/或多克?。瑱z測(cè)試劑●洗滌緩沖液:Tris或磷酸鹽緩沖鹽溶液,pH 7.4,補(bǔ)充了Tween @ 20表面活性劑(TBST)或PBST)●轉(zhuǎn)移蛋白的印跡吸筆座尺寸比較大印跡尺寸(厘米)多印跡4.5 x8.4小型的7.5 x 8.48.5 x 13.5。 一般準(zhǔn)則●如果蛋白質(zhì)已經(jīng)轉(zhuǎn)移到已經(jīng)干燥的PVDF膜上,請(qǐng)用100%重新潤(rùn)濕印跡甲醇,然后在組裝前用蒸餾水沖洗。如果蛋白質(zhì)已轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜干燥后,用蒸餾水重新益啟生物提供專業(yè)的細(xì)胞計(jì)數(shù)器。長(zhǎng)寧區(qū)MerckAmicon攪拌式過(guò)濾器Merck儀器報(bào)價(jià)
項(xiàng)卡(圖8)創(chuàng)建和啟動(dòng)自定義協(xié)議。要手動(dòng)控制流量,使用“手動(dòng)模式”標(biāo)簽選擇所需的井,壓力,和溫度(如果使用加熱歧管)。有關(guān)自動(dòng)化協(xié)議或每次融合的手冊(cè),請(qǐng)參閱CellASICO《ONIX2微流體系統(tǒng)用戶指南》。注意:對(duì)于需要快速交換溶液的實(shí)驗(yàn),請(qǐng)執(zhí)行以下操作可以應(yīng)用以下技術(shù):高壓(55.2kPa[8psi)下的流量對(duì)于初始過(guò)渡,然后將流量減小到標(biāo)準(zhǔn)壓力長(zhǎng)期暴露于6.9-13.8kPa(1-2psi)。 軟件操作下圖顯示了使用ellAsICEONX2軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的兩種模式,請(qǐng)參閱CllASICEONIX2MicrofuidieSystem用戶有關(guān)軟件功能的詳細(xì)信息的指南。圖7.手動(dòng)模式降低了ONIX2系統(tǒng)的迭代操作??梢允謩?dòng)設(shè)置操作參數(shù),此模式a5o提供了選項(xiàng)運(yùn)行簡(jiǎn)短的自動(dòng)印版設(shè)置序列,這些序列奉賢區(qū)Merck細(xì)胞計(jì)數(shù)器Merck儀器銷售上海益啟生物的聯(lián)系電話。
有關(guān)詳細(xì)信息,請(qǐng)參見表2?!癫唤ㄗh在SNAP i.d. @ 2.0系統(tǒng)中剝離印跡。印跡已被剝離可以從阻塞步驟開始在SNAP i.d.o 2.0系統(tǒng)中對(duì)遵循標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議的系統(tǒng)進(jìn)行重新探測(cè)?!袢绻恍枰?jiǎng)冸x(例如,如果使用其他二抗進(jìn)行檢測(cè)),則可以重新檢測(cè)印跡快速清洗后,立即在SNAP i.d.9 2.0系統(tǒng)中使用。 優(yōu)化準(zhǔn)則抗體已經(jīng)開發(fā)了優(yōu)化指南,以使用戶能夠轉(zhuǎn)換所用抗體的濃度將標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)測(cè)定法濃縮至適用于SNAP i.d. @ 2.0系統(tǒng)的濃度。大多數(shù)用戶會(huì)能夠使用相同量的抗體,但與標(biāo)準(zhǔn)品相比,體積更小,濃度更高免疫檢測(cè)。但是,當(dāng)使用擴(kuò)展抗體方案(第12頁(yè))時(shí),可以使用相同的方法通常用于標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)的一抗的濃度,體積和時(shí)間,其次是較高濃度的二抗,持續(xù)時(shí)間較短。表1.如何根據(jù)SNAP i.d.9
預(yù)先裝有特定于印版的默認(rèn)設(shè)置。這些設(shè)置順序可以編輯如果需要圖8.協(xié)議編輯器模式允許創(chuàng)建和編輯實(shí)驗(yàn)協(xié)議。協(xié)議由一系列環(huán)境組成控制和/或每個(gè)融合步驟??梢愿鶕?jù)需要添加和更改步驟。準(zhǔn)備好協(xié)議后,可以使用“運(yùn)行”選項(xiàng)卡來(lái)執(zhí)行它。在下面概述的培養(yǎng)方案示例中,通過(guò)將壓力(27.6kPa[4ps]持續(xù)15秒)固定到孔組中,將ells從8孔加載6和8通過(guò)以345kPa(5psi)的流速流動(dòng)4和5孔5分鐘,將未捕獲的細(xì)胞從腔室中沖洗掉。接下來(lái)的孔被灌注從孔1提取30分鐘的基線洗滌液或生長(zhǎng)液。將Cls從孔2暴露于誘導(dǎo)劑1小時(shí),然后將誘導(dǎo)劑用H2O沖洗掉。從1孔中洗滌或生長(zhǎng)溶液30分鐘。在第3孔中對(duì)第二個(gè)誘導(dǎo)劑重復(fù)上述??兩個(gè)步驟。CAX2-MXT20歧管,使用setpaintof37吧。 規(guī)格產(chǎn)品訂購(gòu)信息,續(xù)培上海益啟生物細(xì)胞跨膜電阻儀訂購(gòu)方便。
白的免疫檢測(cè):SNAP i.d.“ 2.0系統(tǒng)與SNAP 1.d.系統(tǒng)(首先代)與標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)一種。 SNAPi.d。 2.0蛋白質(zhì)檢測(cè)b??煺盏鞍踪|(zhì)檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)Midi印跡系統(tǒng)首先代,單孔免疫檢測(cè)對(duì)照,茴香霉素處理和PDGF處理的3T3小鼠成纖維細(xì)胞裂解液(10-0.63 ug)被轉(zhuǎn)移到Immobilon9-P膜上。印跡被阻止含0.5%的非脂肪干mik(NFDM),并在加筋的鹽水中制備含0. 1%Tweene 20表面活性劑(TBST),并用主要抗B-Tubulin探測(cè)(MAB3408)和次級(jí)HRP偶聯(lián)的山羊螞蟻(AP1 24P)在上述條件。將印跡暴露于X射線膠片一分鐘。圖2. erbB2的免疫檢測(cè):SNAP i.d.9 2.0系統(tǒng)與SNAP i.d.系統(tǒng)(首先代)與標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)s。 S上海益啟細(xì)胞跨膜電阻儀訂購(gòu)方便。奉賢區(qū)Merck細(xì)胞計(jì)數(shù)器Merck儀器銷售
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盤,請(qǐng)?jiān)诓襟E5之后插入托盤。有關(guān)詳細(xì)信息,請(qǐng)參閱“抗體恢復(fù)”部分。 6.在整個(gè)表面上涂適量的一抗吸墨紙架的數(shù)量(對(duì)于MultiBlot為2.5毫升,對(duì)于迷你吸墨紙為5毫升,或10 mL用于Midi印跡)。7.在室溫下孵育10分鐘。解決方案將是吸收到污點(diǎn)固定器中,表面可能會(huì)變干。重要提示:請(qǐng)勿在吸塵器清潔后再使用真空吸塵器。孵育10分鐘。8.向下壓框架并施加真空。等待5-8秒,直到框架完全是空的。9.在連續(xù)運(yùn)行真空的情況下,添加30 mL洗滌緩沖液(MultiBlot為15毫升)。重復(fù)洗滌步驟3次以上(總共4次洗滌)。當(dāng)框架完全為空時(shí),將TURN真空關(guān)閉。10.在印跡架的表面上涂適量的二抗(對(duì)于多印跡,為2.5 mL,5毫升用于迷你印跡,或10毫升用于Midi印跡)。在室溫下孵育10分鐘,然后長(zhǎng)寧區(qū)MerckAmicon攪拌式過(guò)濾器Merck儀器報(bào)價(jià)