《數(shù)字化轉(zhuǎn)型和跨學(xué)科實(shí)踐暑期研討會(huì)》詳解
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檢測(cè)范圍和靈敏度不同,用量少時(shí),可使用分裝,前期是它的長(zhǎng)久性不是很好。試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線較高點(diǎn)OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。試劑盒重復(fù)性好,板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<9 %。試劑的組份都多給20%的富余量,確保完成48/96孔的檢測(cè),避免分次檢測(cè)可能造成試劑量不足的情況。檢測(cè)抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗(yàn)操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA試劑盒加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。云南ELISA試劑盒采購(gòu)
包被 抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面,可能原理是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原抗體反應(yīng)等免疫活性 。標(biāo)記 抗原或者抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點(diǎn) 。顯色 酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或者抗體結(jié)合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計(jì)算抗原或者抗體的相對(duì)含量。ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)檢測(cè)對(duì)象的不同,對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)法也需要注意一點(diǎn),酶標(biāo)記抗原和待測(cè)樣本一定要事先混勻好,然后同時(shí)加入固相載體,不然會(huì)造成不公平競(jìng)爭(zhēng),檢測(cè)出現(xiàn)偏差;抗體的檢測(cè)設(shè)計(jì) 就方法來說,有間接法、雙抗原夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法和捕獲法四種設(shè)計(jì)。云南ELISA試劑盒采購(gòu)ELISA試劑盒底物被酶催化成為有色產(chǎn)物。
ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了普遍的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。下面分析ELISA試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法。選擇試劑,選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣,可能原因:血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
ELISA試劑盒其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的較適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值較大而蛋白量較少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。ELISA試劑盒穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便。
ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到全世界科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA試劑盒測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原。湖北ELISA試劑盒哪里有賣
ELISA是將抗原、抗體的免疫反應(yīng)和酶的高效催化反應(yīng)有機(jī)結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合性技術(shù)。云南ELISA試劑盒采購(gòu)
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。云南ELISA試劑盒采購(gòu)
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