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ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。然而,影響Elisa試驗(yàn)結(jié)果的因素很多,故加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。ELISA試劑盒特點(diǎn):高效、靈敏、特異的抗體;穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型;節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標(biāo)液1PPM,就是1毫克/升,而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說(shuō)你的回收率是99%,這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系,說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度。酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。山東ELISA試劑盒生產(chǎn)哪家好
ELISA試劑盒不論何種載體,在運(yùn)用前均可進(jìn)行挑選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,ELISA試劑盒時(shí)刻及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它實(shí)驗(yàn)條件相一起,觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)一般為1~10μg/ml。山東ELISA試劑盒生產(chǎn)哪家好ELISA試劑盒應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了普遍的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。下面分析ELISA試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法。選擇試劑,選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣,可能原因:血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
Elisa試劑盒在實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。ELISA是蛋白定量檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的要求也極其嚴(yán)格。
ELISA試劑盒收集標(biāo)本請(qǐng)按下列流程進(jìn)行操作:細(xì)胞上清標(biāo)本離心去除懸浮物后即可。血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液。血漿標(biāo)本,推薦用EDTA的方法收集。若待測(cè)樣本不能及時(shí)檢測(cè),標(biāo)本收集后請(qǐng)分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融。血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑。標(biāo)本應(yīng)清澈透明,檢測(cè)前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過(guò)離心去除。請(qǐng)勿使用溶血,或污染的標(biāo)本檢測(cè),否則結(jié)果將不準(zhǔn)確。試劑盒提純方法:對(duì)于易揮發(fā)的試劑,如常用的無(wú)機(jī)酸,有機(jī)溶劑等是比較常用的提純方法,根據(jù)沸點(diǎn)的高低選用常壓或減壓蒸餾法。ELISA試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清。佛山ELISA試劑盒使用方法
酶標(biāo)抗體,它是ELISA中關(guān)鍵試劑之一,既要求有酶催化活性,又能保持了抗體的免疫活性。山東ELISA試劑盒生產(chǎn)哪家好
Elisa試劑盒加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中藥物的殘留量。Elisa試劑盒技術(shù)原理:抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面a的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,這些是要注意的。山東ELISA試劑盒生產(chǎn)哪家好
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