湖北ELISA試劑盒使用方法

ELISA檢測試劑盒的保質(zhì)期一般都是在一年，如果保存得當(dāng)?shù)脑?，不會出現(xiàn)問題的。但不要反復(fù)凍融。當(dāng)然如果是正常的ELISA試劑盒，應(yīng)該放在4℃左右冰箱保存。但要注意的是，如果將試劑盒剛從冰箱里面拿出來就立即使用的話，可能會影響，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。建議：先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測定要求。ELISA試劑盒保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。湖北ELISA試劑盒使用方法

ELISA試劑盒切記在加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。在吸取液體時，要用量程和需要量接近的噴頭去吸，減少誤差。務(wù)必做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。安徽ELISA試劑盒哪家便宜ELISA試劑盒用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

Elisa生物檢測是一種敏感度高，同時特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實驗檢測方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。Elisa試劑盒評價標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，應(yīng)大于等于0.9900。靈敏度：反應(yīng)試劑盒的較低檢測濃度，特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)，回收率：判斷實驗的準(zhǔn)確性和特異性，目前市面上的Elisa試劑盒檢測原理主要有以下四種：直接法，間接法，夾心法，競爭法。ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株關(guān)鍵氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與一次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。ELISA檢測操作步驟復(fù)雜，可能會影響測定結(jié)果的因素較多。安徽ELISA試劑盒哪家便宜

ELISA試劑盒實驗中，加樣后及時放人孵箱，標(biāo)本較多時，要分批操作。湖北ELISA試劑盒使用方法

ELISA試劑盒測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。ELISA試劑盒運(yùn)用注意事項：試劑蛻變的痕跡發(fā)色試劑有任何顏色標(biāo)明發(fā)色劑蛻變，應(yīng)當(dāng)棄之。0規(guī)范的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表明試劑或許蛻變。室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致一切規(guī)范的OD值偏低。在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔枯燥的情況，ELISA試劑盒則會出現(xiàn)規(guī)范曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。湖北ELISA試劑盒使用方法

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