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ELISA試劑盒要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排裝置各一支。吸取不同的液體后,要更換裝置頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。要在實(shí)驗(yàn)前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)時,要使底物避光保存。用裝置吸取液體時速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。吸取液體時,要用量程和需要量接近的裝置去吸,減少誤差。將液體加到酶標(biāo)孔中時,避免裝置頭和孔內(nèi)液體接觸,可使裝置頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。ELISA試劑盒保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。清遠(yuǎn)ELISA試劑盒多少錢
在ELISA試劑盒的使用過程中常見問題有很多。如:加樣器不確,尤其10ul以下的加樣器,對結(jié)果影響極大、保溫設(shè)備不良、洗滌用水不規(guī)范。如何解決這些問題呢?1.在使用過程校正加樣器;10ul以下加樣器采用進(jìn)口產(chǎn)品;2.仔細(xì)校正溫度到37℃,水浴箱為佳;3.必須使用去離子水或蒸餾水,不得用自來水、礦泉水等。4.認(rèn)真閱讀使用說明書。5.樣品加樣:(1)加樣時一定要仔細(xì)。加樣后,再檢查,以防漏加、錯加。(2)加樣后,反復(fù)抽吸3次混勻,防止血清聚集孔底,導(dǎo)致非特異性吸附。6.洗滌:(1)每次注水洗滌,應(yīng)靜止30秒鐘;(2)選用吸水紙作為襯墊,每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分;(3)可選用塑料洗滌瓶。清遠(yuǎn)ELISA試劑盒多少錢ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性”和“陰性”來陳述成果。兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”。
珠式ELISA試劑盒的反應(yīng)往往靈敏。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌徹底,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。用于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,國際上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測,有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA試劑盒板的特點(diǎn)是可以同時進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測,并可在特制的比色計上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA試劑盒檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
ELISA試劑盒手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法:標(biāo)本為血清:盡可能將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,**后必須立即顛倒**管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。在ELISA 操作中,洗滌是較主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌。
ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。ELISA試劑盒再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。ELISA試劑盒產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。 ELISA試劑盒加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。山東ELISA試劑盒哪家靠譜
影響ELISA試驗(yàn)結(jié)果的因素很多,故加強(qiáng)各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。清遠(yuǎn)ELISA試劑盒多少錢
在ELISA試劑盒過程中不是反應(yīng)聚,但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯待塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。因此在ELISA試劑盒測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。 在標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯(吐溫,Tween)一類物質(zhì)即右達(dá)到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯,為非離子型的表面張力物質(zhì),常作為助溶劑。根據(jù)脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號,結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯20,在ELISA試劑盒中較為常用。它的洗滌效果好,并具有減少非特異性吸附和增強(qiáng)抗原抗體結(jié)合的作用。在定性測定中有時不強(qiáng)調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性,例如規(guī)定為加樣一滴。清遠(yuǎn)ELISA試劑盒多少錢
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