ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了普遍的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。下面分析ELISA試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應的解決辦法。選擇試劑,選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣,可能原因:血清或血漿標本分離不好即進行加樣;ELISA試劑盒以陽性對照與陰性對照控制試驗條件。廣東ELISA試劑盒
大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP 為標記的ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。一般說來,在5 天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。安徽ELISA試劑盒品牌Elisa試劑盒避免用手接觸,有毒。
ELISA試劑盒操作要點一共有七大點,它們分別是:標本的采取和保存、試劑的準備、加樣、保溫、洗滌、顯色和比色、酶標比色儀、結(jié)果判斷。作ELISA試劑盒測定的標本十分廣闊,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA試劑盒檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA試劑盒中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規(guī)方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標記的ELISA試劑盒測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
ELISA試劑盒檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作,保證實驗結(jié)果的重復性。白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種抗體形成系統(tǒng),它的生理特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導和基于和白介素3協(xié)同作用的生長刺激等,也備受關(guān)注. 并且已證實白介素-6與病理學存在穩(wěn)定的相關(guān)關(guān)系.例如,報道多種疾病的生長因子為白介素-6, 骨髓瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身免疫疾病發(fā)揮重要的作用.。ELISA試劑盒方便試驗操作者準確地做稀釋工作。
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。影響ELISA試驗結(jié)果的因素很多,故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。廣東ELISA試劑盒
ELISA試劑盒適用于臨床標本的檢查。廣東ELISA試劑盒
ELISA試劑盒用量少時,可使用分裝,前期是它的長久性不是很好。ELISA試劑盒測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好。以免疫學反應為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反響的完結(jié)需求有一定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機。廣東ELISA試劑盒
深圳市寶安康生物技術(shù)有限公司發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大,現(xiàn)有一支專業(yè)技術(shù)團隊,各種專業(yè)設(shè)備齊全。在深圳市寶安康生物近多年發(fā)展歷史,公司旗下現(xiàn)有品牌寶安康,寶安康生物,深圳寶安康等。公司堅持以客戶為中心、一般經(jīng)營項目是:生物技術(shù)產(chǎn)品、食品安全檢測盒、酶聯(lián)免疫檢測盒、檢測卡的研發(fā)與銷售(不含食品、藥品、醫(yī)療器械等需審批的項目);國內(nèi)貿(mào)易(法律、行政法規(guī)、國務*決定規(guī)定在登記前須經(jīng)批準的項目除外);貨物及技術(shù)進出口(法律、行政法規(guī)禁止的項目除外,法律、行政法規(guī)限制的項目須取得許可后方可經(jīng)營)。許可經(jīng)營項目是:食品安全檢測盒、酶聯(lián)免疫檢測盒、檢測卡的生產(chǎn)(不含醫(yī)療器械等限制項目)。(克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇類等);水產(chǎn)品檢測類(孔雀石綠、氯霉素、呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物、呋喃妥因代謝物、呋喃西林代謝物、甲基睪酮、己烯雌酚);霉菌*素類(黃曲霉*素B1、黃曲霉*素M1、玉米赤霉烯酮、嘔吐*素、赭曲霉*素A、T-2*素、伏馬菌素);乳制品檢測類、蜂蜜檢測類等。金剛烷胺、喹乙醇、磺胺類、四環(huán)素類、三聚氰胺、雌二醇、雌三醇、氟苯尼考、氟苯尼考胺、甲基睪丸酮、替米考星、阿苯達唑、西地拉非、羅丹明、安定等一百多種快速檢測試劑盒與膠體金檢測卡;動物疫病檢測試劑盒有豬瘟、口蹄疫、藍耳病、偽狂犬、圓環(huán)、細小等;供出入境檢驗局、農(nóng)業(yè)局、養(yǎng)豬場、動物防疫監(jiān)督所以及肉類食品加工。市場為導向,重信譽,保質(zhì)量,想客戶之所想,急用戶之所急,全力以赴滿足客戶的一切需要。深圳市寶安康生物技術(shù)有限公司主營業(yè)務涵蓋食品安全檢測試劑,膠體金檢測卡,ELISA試劑盒,獸藥殘留檢測,堅持“質(zhì)量保證、良好服務、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。