茂名ELISA試劑盒生產(chǎn)商

來源: 發(fā)布時間:2023-03-20

酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致疾病作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致疾病、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。ELISA屬固相,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。茂名ELISA試劑盒生產(chǎn)商

ELISA試劑盒的反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。解決辦法:保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水特殊材料)上輕輕拍干; 合理安排,或多用幾臺洗板機。顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑; 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法: 1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流; 3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械??赡茉蛉缂咏K止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。茂名ELISA試劑盒生產(chǎn)商ELISA試劑盒固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

洗滌在ELISA 試劑盒過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以去除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來??梢哉f在ELISA 操作中,洗滌是較主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。ELISA試劑盒實驗中,加樣后及時放人孵箱,標(biāo)本較多時,要分批操作。ELISA試劑盒的配制:對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書,注意每批的細節(jié)。

ELISA試劑盒每加一種試劑前需將其搖勻。在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反響時間到30min。反之,則減短反響時間。反響停止液為2M硫酸,防止接觸皮膚。不要運用過了有用日期的ELISA試劑盒;也不要運用過了有用期的試劑盒中的任何試劑,摻雜運用過了有用期的ELISA檢測試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交流運用不同批號試劑盒中的試劑。當(dāng)然除了注意以上幾點外,選對ELISA試劑盒也很關(guān)鍵,可以很大降低實驗危險性。在ELISA試劑盒過程中不是反應(yīng)聚,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。茂名ELISA試劑盒生產(chǎn)商

ELISA試劑盒的質(zhì)量取決于其原料,也就是抗體對的質(zhì)量。茂名ELISA試劑盒生產(chǎn)商

先將抗原結(jié)合到ELISA板上,隨后分兩步進行檢測:首先加入檢測抗體與抗原特異性結(jié)合,隨后加入酶標(biāo)二抗檢測并利用底物顯色。與直接ELISA相比,間接ELISA用到酶標(biāo)二抗,具有更高的靈敏度,也需要更少的標(biāo)記抗體,更經(jīng)濟。間接ELISA還提供了更大的靈活性,因為不同的一抗能夠與單一標(biāo)記的二抗一同使用。間接ELISA實驗的缺點是存在交叉反應(yīng)的可能性(酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合),可能會增加背景,同時與直接ELISA相比,間接ELISA實驗多了二抗孵育的步驟,實驗周期延長。茂名ELISA試劑盒生產(chǎn)商

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