掃描電鏡樣本處理:新鮮取材后用2.5%戊二醛固定液固定樣本,4℃過夜放置,倒掉2.5%戊二醛固定液,用0.1M,pH7.0的磷酸緩沖液漂洗樣品三次,每次15min;用1%的鋨酸溶液固定樣品1-2h;小心取出鋨酸廢液,用0.1M,pH7.0的磷酸緩沖液漂洗樣品三次,每次15min;用梯度濃度(包括30%,50%,70%,80%,90%和95%五種濃度)的乙醇溶液對樣品進行脫水處理,每種濃度處理15min,再用100%的乙醇處理兩次,每次20 min。用乙醇與醋酸異戊酯的混合液(V/V=1/1)處理樣品30min,再用純醋酸異戊酯處理樣品1h或放置過夜。臨界點干燥。鍍膜,觀察。處理好的樣品在掃描電鏡中觀察。掃描電鏡是一種多功能的儀器、具有很多優(yōu)越的性能、是用途較為廣的一種儀器。四川組織掃描電鏡推薦
掃描電子顯微鏡的制造是依據(jù)電子與物質(zhì)的相互作用。當一束高能的入射電子轟擊物質(zhì)表面時,被激發(fā)的區(qū)域?qū)a(chǎn)生二次電子、俄歇電子、特征x射線和連續(xù)譜X射線、背散射電子、透射電子,以及在可見、紫外、紅外光區(qū)域產(chǎn)生的電磁輻射。同時,也可產(chǎn)生電子-空穴對、晶格振動(聲子)、電子振蕩(等離子體)。原則上講,利用電子和物質(zhì)的相互作用,可以獲取被測樣品本身的各種物理、化學性質(zhì)的信息,如形貌、組成、晶體結(jié)構(gòu)、電子結(jié)構(gòu)和內(nèi)部電場或磁場等等。掃描電子顯微鏡正是根據(jù)上述不同信息產(chǎn)生的機理,采用不同的信息檢測器,使選擇檢測得以實現(xiàn)。如對二次電子、背散射電子的采集,可得到有關(guān)物質(zhì)微觀形貌的信息;對X射線的采集,可得到物質(zhì)化學成分的信息。 重慶生物掃描電鏡多少錢掃描電子顯微鏡的制造是依據(jù)電子與物質(zhì)的相互作用。
由于掃描電子顯微鏡具有上述特點和功能,所以越來越受到科研人員的重視,用途日益普遍。掃描電子顯微鏡已普遍用于材料科學(金屬材料、非金屬材料、納米材料)、冶金、生物學、醫(yī)學、半導體材料與器件、地質(zhì)勘探、病蟲害的防治、災害(火災、失效分析)鑒定、刑事偵察、寶石鑒定、工業(yè)生產(chǎn)中的產(chǎn)品質(zhì)量鑒定及生產(chǎn)工藝控制等。在電子掃描中,把電子束從左到右方向的掃描運動叫做行掃描或稱作水平掃描,把電子束從上到下方向的掃描運動叫做幀掃描或稱作垂直掃描。兩者的掃描速度完全不同,行掃描的速度比幀掃描的速度快,對于1000條線的掃描圖象來說,速度比為1000。
掃描電鏡操作基本步驟 1 、取材 掃描電鏡下觀察的樣品尺寸要求比較寬松,一般1cm3左右樣品都能適合大多數(shù)掃描電鏡觀察。 2 、固定 鋪片培養(yǎng)的細胞取出浸入 PBS 中,漂洗細胞表面。然后將細胞鋪片放入青霉素小瓶中,加 4 ℃ 預冷的 3% 戊二醛,在 4 ℃ 固定 2h 或過夜,吸出固定劑,用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min ,再用 4 ℃ 預冷的 1% 鋨酸。在 4 ℃ 固定 1h ,然后用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min 。 3 、脫水 acetone / 醋酸異戊酯( 1 : 1 )脫水 10min ,接下來醋酸異戊酯脫水 30min ,或用系列梯度酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% )脫水,每種濃度酒精通過 2 次,每次 15min 。 1940年英國劍橋大學初次試制成功掃描電鏡。
生物樣品掃描電鏡常規(guī)掃描電鏡對樣品要求:必須是干燥的,不含水分或揮發(fā)性物質(zhì);具有一定機械強度,能耐受電子束轟擊;具有導電性,被激發(fā)時能夠產(chǎn)生足夠的二次電子。生物材料特點:含水分多,質(zhì)地柔軟,機械強度小;組成元素的原子序數(shù)低,導電性差,激發(fā)后二次電子的產(chǎn)額較少。制樣的任務:通過一系列處理,既要盡量地保存材料的固有形態(tài),又要改良其物理性能,使其適合在電鏡下觀察成像。 電鏡是進行材料表征時用到一種重要工具,幫助觀察材料的微觀形貌。然而,在觀察軟/濕生物材料時(離體組織,帶細胞材料等),涉及到觀察樣品的固定、脫水、干燥、金屬濺射等步驟,處理復雜,耗時較長。英瀚斯掃描電鏡檢測生物樣本!湖南哪家做掃描電鏡拍照
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和透射電鏡相比,掃描電鏡試樣制備比較簡單。在保持材料原始形狀情況下,可以直接觀察和研究試樣表面形貌及其它物理效應(特征),這是掃描電鏡的一個突出優(yōu)點。掃描電鏡的有關(guān)制樣技術(shù)是以透射電鏡、光學顯微鏡及電子探針X射線顯微分析制樣技術(shù)為基礎發(fā)展起來的,有些方面還兼具透射電鏡制樣技術(shù),所用設備也基本相同。但因掃描電鏡有其本身的特點和觀察條件,只簡單地引用已有的制樣方法是不夠的。在進行掃描電鏡觀察時,如試樣表面不導電或?qū)щ娦圆缓?,將產(chǎn)生電荷積累和放電,使得入射電子束偏離正常路徑,較為終造成圖像不清晰乃至無法觀察和照相。四川組織掃描電鏡推薦
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