貴州免疫組化哪家好

免疫組化的抗原修復(fù)

很多抗原的可視性可以通過(guò)抗原修復(fù)來(lái)提高，抗原修復(fù)可以打破福爾馬林固定時(shí)形成的蛋白質(zhì)交聯(lián)，從而使被掩藏的抗原顯現(xiàn)出來(lái)?？乖迯?fù)技術(shù)包括不同時(shí)間長(zhǎng)度的加熱或者利用蛋白酶來(lái)做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加熱的方法通常會(huì)用到微波爐，高壓鍋，蒸箱或水浴。將樣品在接近100°C高溫加熱20分鐘后再冷卻同等的時(shí)間。**常用的抗原修復(fù)液有a)檸檬酸鹽緩沖劑,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用檸檬酸鹽緩沖劑做抗原修復(fù)：檸檬酸鹽緩沖劑配方:10mM檸檬酸鈉,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM檸檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0將含有檸檬酸鈉或檸檬酸鹽緩沖劑的染色盤(pán)放到蒸箱或者水浴中，預(yù)熱到95-100°C。將切片浸沒(méi)于染色盤(pán)中。蓋子虛掩，孵育20-40分鐘(研究者需自己決定比較好的孵育時(shí)間)。關(guān)掉蒸箱或水浴，將染色盤(pán)置于室溫下，讓切片冷卻20分鐘。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分鐘。開(kāi)始封閉步驟。 英瀚斯生物為您詳解免疫組化實(shí)驗(yàn)指南！貴州免疫組化哪家好

免疫組化結(jié)果要如何分析？

 （1）陽(yáng)性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法。在40*光鏡下，隨機(jī)選擇不重疊的10個(gè)視野，機(jī)器或人工計(jì)數(shù)陽(yáng)性著色細(xì)胞，每組3~6張不同動(dòng)物組織切片，然后進(jìn)行組間比較即可。

（2）灰密度分析法。可以通過(guò)在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可。

（3）評(píng)分法。用光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽(yáng)性范圍進(jìn)行評(píng)分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**終可以分?jǐn)?shù)相加，再進(jìn)行比較。對(duì)于以上這幾種方法，各有利弊，請(qǐng)細(xì)心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。

英瀚斯生物，專業(yè)病理染色團(tuán)隊(duì)，不止做檢測(cè)，還有專業(yè)病理分析。 貴州免疫組化哪家好免疫組化樣本如何處理？

免疫組化的局限性。靈敏度高、精確性和特異性是一種理想的cancer標(biāo)記物必須具有的，但至今所發(fā)現(xiàn)的cancer標(biāo)記物還沒(méi)有能完全滿足這些標(biāo)準(zhǔn)。某些正常細(xì)胞也分泌一些cancer標(biāo)記物，因此cancer細(xì)胞學(xué)并不是單獨(dú)產(chǎn)生一種標(biāo)記物，即選用一組抗體比單一抗體更有利。在cancer診斷中評(píng)估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面。在免疫組化操作中都必須有適當(dāng)?shù)年?yáng)性與陰性對(duì)照，作為技術(shù)完整性質(zhì)量控制，如對(duì)照組被忽略或不理想時(shí)，免疫組化染色的結(jié)果要謹(jǐn)慎對(duì)待，免疫組化的正確結(jié)果不僅要依靠技術(shù)步驟上規(guī)范化操作，而且有賴于正確的解釋，在報(bào)告免疫組化染色結(jié)果時(shí)不應(yīng)孤立地解釋，應(yīng)考慮到診斷與鑒別診斷、所應(yīng)用的抗體特性、所研究組織性質(zhì)，同時(shí)還要注意假陽(yáng)性與假陰性結(jié)果的干擾。

免疫組化結(jié)果背景染色較深的原因有哪些？

 （1）抗體濃度過(guò)高：一抗?jié)舛冗^(guò)高是常見(jiàn)的原因之一。解決辦法是，每次使用新抗體前應(yīng)當(dāng)對(duì)其工作濃度進(jìn)行測(cè)試，使每一抗體個(gè)體化，找到適合自己實(shí)驗(yàn)室的理想工作濃度，既使是即用型的抗體也應(yīng)如此，不能只簡(jiǎn)單的按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色。

（2）抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度較高：解決辦法是，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，比較好隨身佩帶報(bào)時(shí)表或報(bào)時(shí)鐘，及時(shí)提醒，避免因遺忘而造成時(shí)間延長(zhǎng)?，F(xiàn)在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的時(shí)間不是傳統(tǒng)的1小時(shí)，而是30分鐘，因此，要根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整。 

（3）DAB變質(zhì)和顯色時(shí)間太長(zhǎng)：DAB比較好現(xiàn)用現(xiàn)配，如有沉渣應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾后再用。配制好的DAB不應(yīng)存放時(shí)間太長(zhǎng)，因?yàn)樵跊](méi)有酶的情況下，過(guò)氧化氫也會(huì)游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應(yīng)而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監(jiān)控，達(dá)到理想的染色程度時(shí)立即終止反應(yīng)。但是當(dāng)染**太多時(shí)或用染色機(jī)時(shí)，這樣做似乎不現(xiàn)實(shí)，但至少應(yīng)對(duì)一些新的或少用的抗體顯色時(shí)進(jìn)行監(jiān)控，避免顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

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免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷，英瀚斯生物為您介紹。對(duì)于反應(yīng)性增生還是cancer性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測(cè)B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來(lái)區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時(shí)，濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá)，bcl-2陽(yáng)性。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通過(guò)對(duì)cancer細(xì)胞增生的程度作出評(píng)價(jià)，從而提示增生細(xì)胞的良惡性。免疫組化失敗的原因？貴州免疫組化哪家好

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免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無(wú)色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來(lái)源一致。傾去，勿洗。

6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過(guò)夜（比較好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來(lái)水充分沖洗。

13）可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?貴州免疫組化哪家好