免疫組化在在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來(lái)越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類、預(yù)后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術(shù)也存在一些局限性,因此,深入研究免疫組化原理和技術(shù),并努力實(shí)現(xiàn)規(guī)范化的操作,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床醫(yī)療中的作用。
觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況,對(duì)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué),由于抗原與抗體特異性結(jié)合,因此通過(guò)免疫組化使標(biāo)記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類:組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本,其中制作組織標(biāo)本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存好,有利于各種染色對(duì)照觀察,而且能長(zhǎng)期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標(biāo)本制作方法。 英瀚斯生物為您詳解免疫組化實(shí)驗(yàn)指南!遼寧小鼠免疫組化怎么樣
什么是免疫組化?免疫組化的原理是什么?
1、定義:用標(biāo)記的特異性抗體對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry)技術(shù)。
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2、原理:根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng),前者再用標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,通過(guò)呈色反應(yīng)或熒光來(lái)顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分,在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。 江蘇靠譜免疫組化要多久免疫組化相關(guān)知識(shí)匯總。
免疫組化的DAB顯色時(shí)間如何把握?
1、DAB顯色時(shí)間不是固定的,主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間,到出現(xiàn)淺棕色本底時(shí)即可沖洗;
2、DAB顯色時(shí)間很短(如幾秒或幾十秒)就出現(xiàn)很深的棕褐色,這很可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)高或抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間;
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3、此外,若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深,還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,需要延長(zhǎng)封閉時(shí)間;
4、DAB顯色時(shí)間很長(zhǎng)(如超過(guò)十幾分鐘)才出現(xiàn)陽(yáng)性染色,一方面可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短(比較好一抗4度過(guò)夜);另一方面就是封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
免疫組化的應(yīng)用領(lǐng)域
免疫組化在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用。在**學(xué)中,免疫組化通常被用于**標(biāo)志物的檢測(cè),幫助確定**的類型、分級(jí)和預(yù)后。例如,免疫組化通過(guò)檢測(cè)ER、PR和HER2的表達(dá),可以指導(dǎo)乳腺*的治療方案。在神經(jīng)科學(xué)中,免疫組化用于研究神經(jīng)元的分布和功能。在免疫學(xué)中,免疫組化可以用于檢測(cè)炎癥細(xì)胞和免疫細(xì)胞在組織中的分布和水平。此外,免疫組化實(shí)驗(yàn)技術(shù)還被廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學(xué)、病理學(xué)和藥物研發(fā)等領(lǐng)域。 動(dòng)物、細(xì)胞的免疫組化、免疫熒光,就找英瀚斯生物!
免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標(biāo)記的切片均呈陰性,無(wú)陽(yáng)性信號(hào),假陰性結(jié)果不是真實(shí)的反應(yīng)。導(dǎo)致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復(fù)方法選擇不當(dāng),根據(jù)不同的抗原特點(diǎn)采用不同的修復(fù)方法,大多數(shù)抗體要求熱修復(fù),熱修復(fù)又包括高壓修復(fù)、微波修復(fù)及煮沸熱修復(fù);而對(duì)某些細(xì)胞內(nèi)抗原和細(xì)胞間質(zhì)抗原需要用酶消化,如表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin則不用修復(fù);(2)一抗本身的問(wèn)題:一抗效價(jià)降低或失效。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)診或漏診,進(jìn)而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問(wèn)題的可通過(guò)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照,比較兩者染色結(jié)果。若陽(yáng)性對(duì)照有表達(dá),表明試劑和染色體系及實(shí)驗(yàn)步驟均無(wú)問(wèn)題;若陽(yáng)性對(duì)照無(wú)表達(dá),則檢測(cè)過(guò)程中某一試劑或某個(gè)步驟存在問(wèn)題,應(yīng)逐一查找原因。有沒(méi)有推薦的免疫組化外包公司?青海靠譜免疫組化要多少錢
做免疫組化意味什么?遼寧小鼠免疫組化怎么樣
免疫組化的發(fā)展路程?在臨床病理診斷中,免疫組織化學(xué)(IHC)是一種很重要的技術(shù)和手段,從20世紀(jì)70年代開始,免疫組化技術(shù)就應(yīng)用于病理診斷,對(duì)于診斷cancer、cancer分類、判斷預(yù)后產(chǎn)生了巨大的影響,同時(shí)也擴(kuò)展了人們對(duì)于各種疾病及cancer形成過(guò)程的認(rèn)識(shí),提高了病理診斷與研究水平。但是,隨著免疫組化的廣泛應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)免疫組化技術(shù)存在一些局限性。深入研究免疫組化原理和技術(shù),必須熟悉各種抗體真陽(yáng)性反應(yīng)部位,實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化,使免疫組化在病理診斷中發(fā)揮比較大的輔助作用。如果您有免疫組化相關(guān)的實(shí)驗(yàn),可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。遼寧小鼠免疫組化怎么樣