tiRNA-Gly直接與RBM17相互作用，調(diào)控RBM17在PTC細(xì)胞中的表達(dá)
為了探究tiRNA-Gly在促*中分子機(jī)制，作者合成了生物素標(biāo)記的tiRNA-Gly及其反義序列，進(jìn)行RNApull-down實(shí)驗(yàn)，進(jìn)而挖掘K1細(xì)胞中與tiRNA-Gly相互作用的蛋白。結(jié)果發(fā)現(xiàn)了一個(gè)50KD左右大小的條帶，選擇經(jīng)質(zhì)譜測(cè)定肽數(shù)>3和獨(dú)特肽數(shù)>3的蛋白，獲得了5個(gè)可能的tiRNA-Gly相互作用蛋白，其中RBN17通過(guò)了WB驗(yàn)證（圖2B）。RIP實(shí)驗(yàn)也證實(shí)tiRNA-Gly在RBM17抗體組富集（圖3C）。進(jìn)一步RIP實(shí)驗(yàn)表明，tiRNA-Gly在RBM17全長(zhǎng)序列中***富集，但在UHM截?cái)嗪蟮男蛄兄懈患?**下降，表明tiRNA-Gly和RBM17的相互作用依賴UHM（圖3D）。此外，與tiRNA-Gly的相互作用促進(jìn)了K1細(xì)胞RBM17從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，雖然tiRNA-Gly主要定位于細(xì)胞質(zhì)，但同時(shí)導(dǎo)致K1細(xì)胞胞質(zhì)RBM17蛋白水平降低，核RBM17蛋白水平升高（圖3E-G）。因此，這些研究表明tiRNA-Gly與RBM17的UHM結(jié)合促進(jìn)RBM17的核轉(zhuǎn)運(yùn)。 在786-O和A498細(xì)胞中CDKN3敲除后的western blot分析證實(shí)了這一關(guān)系.重慶標(biāo)書整體服務(wù)
CRC細(xì)胞外泌體的表征
作者分離從CRC細(xì)胞表面脫落的各種囊泡，通過(guò)電子顯微鏡、納米顆粒大小電位分析和蛋白質(zhì)印跡鑒定外泌體。為了確定外泌體是否可以被CRC細(xì)胞內(nèi)化，用熒光染料PKH67標(biāo)記外泌體，然后將它們與SW480細(xì)胞共培養(yǎng)，結(jié)果顯示SW480細(xì)胞表現(xiàn)出高吸收效率。與PKH67標(biāo)記的外泌體孵育24小時(shí)后，超過(guò)90%的SW480細(xì)胞對(duì)PKH67熒光呈陽(yáng)性，表明外泌體被SW480細(xì)胞內(nèi)化。
轉(zhuǎn)移性CRCSW620細(xì)胞分泌的外泌體促進(jìn)CRC細(xì)胞的遷移、侵襲和EMT
作者使用細(xì)胞系SW480和SW620作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，通過(guò)CCK-8在24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)測(cè)定細(xì)胞活力。結(jié)果表明，SW480-exo或SW620-exo細(xì)胞對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有顯著影響。此外，平板集落形成分析顯示SW480-exo或SW620-exo細(xì)胞之間的生長(zhǎng)沒(méi)有差異。然而，來(lái)自轉(zhuǎn)移性CRCSW620細(xì)胞的外泌體通過(guò)Transwell測(cè)定顯著促進(jìn)了SW480細(xì)胞的遷移和侵襲。此外，與SW480-exo和對(duì)照組相比，SW620-exo提高了SW480細(xì)胞的傷口愈合能力。蛋白質(zhì)印跡分析以確定與EMT相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。結(jié)果表明，相對(duì)于SW480-exo處理，SW620-exo處理顯著增加波形蛋白、纖連蛋白和N-鈣粘蛋白的表達(dá)并降低E-鈣粘蛋白的表達(dá)，表明源自轉(zhuǎn)移性CRC細(xì)胞的外泌體在SW480中誘導(dǎo)了EMT。 上海標(biāo)書TRIM25是介導(dǎo)IGF2BPs泛素化的E3連接酶。
circPDE3B促進(jìn)體外ESCC細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲
我們使用功能缺失和功能獲得策略來(lái)研究circPDE3B在ESCC細(xì)胞中的生物學(xué)功能。CCK-8結(jié)果表明circPDE3B敲低***抑制了TE-1和EC9706細(xì)胞的增殖能力。菌落形成實(shí)驗(yàn)表明，circPDE3B對(duì)保持高的菌落形成能力有重要影響。同樣，EdU實(shí)驗(yàn)表明，circPDE3B敲低抑制了ESCC細(xì)胞的DNA合成率。Transwell分析顯示，與sh-NC(陰性對(duì)照)組相比，sh-circPDE3B組遷移和侵襲的細(xì)胞明顯更少。此外，circPDE3B過(guò)表達(dá)與細(xì)胞生長(zhǎng)能力***增加相關(guān)，并**增強(qiáng)TE-10和KYSE-410細(xì)胞的遷移和侵襲潛能。綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明circPDE3B在體外可促進(jìn)細(xì)胞增殖，***增強(qiáng)ESCC細(xì)胞的侵襲和遷移。
A.29名兒童在進(jìn)行異體造血干細(xì)胞移植前、移植時(shí)、移植后即刻以及后期隨訪時(shí)均進(jìn)行了監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)患者的基線特征、臨床結(jié)果、免疫細(xì)胞計(jì)數(shù)以及炎癥和***標(biāo)志物。表S1(附加文件1)詳細(xì)描述了患者特征。宿主免疫系統(tǒng)參數(shù)與腸道、口腔和鼻腔微生物群的縱向動(dòng)力學(xué)相關(guān)，這些微生物群在指定的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行了評(píng)估。B.每個(gè)身體部位HSCT前、移植時(shí)和移植后的細(xì)菌α多樣性以log10變換后的y軸顯示。星號(hào)表示時(shí)間點(diǎn)間的中值逆Simpson指數(shù)存在***差異。C.相對(duì)于HSCT的時(shí)間點(diǎn)LDA分析。對(duì)于糞便樣本，HSCT后立即采集的樣本LDA評(píng)分為陽(yáng)性。對(duì)于口腔和鼻腔樣本，在HSCT前和后期隨訪時(shí)間點(diǎn)樣本的LDA評(píng)分均為陽(yáng)性PCOS大鼠血清水蘇糖水平升高。
接下來(lái)，通過(guò)體外復(fù)制、配對(duì)子細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)移植研究了HoxBlinc過(guò)表達(dá)對(duì)造血干細(xì)胞自我更新和再生能力的影響。在HoxBlincTg LSK細(xì)胞中，連續(xù)4輪的復(fù)制電位均***高于WT細(xì)胞(圖3d)。使用WT和HoxBlincTg原始CD34?LSK細(xì)胞的配對(duì)子細(xì)胞檢測(cè)顯示，具有對(duì)稱自我更新能力的HoxBlincTg CD34?LSK細(xì)胞比例更高，而進(jìn)行對(duì)稱分化或不對(duì)稱自我更新的細(xì)胞比WT減少（圖3e）。競(jìng)爭(zhēng)移植實(shí)驗(yàn)表明，HoxBlincTg BM細(xì)胞移植后，受體外周血中供體細(xì)胞(CD45.2+)嵌合率穩(wěn)定上升，移植7個(gè)月后達(dá)到~80%，而WT BM細(xì)胞移植后小鼠外周血中CD45.2+細(xì)胞群保持在~50%（圖3f）。有趣的是，接受HoxBlincTg BM細(xì)胞的小鼠在移植后2.5-7個(gè)月死亡率更高(圖3g)。總體而言，HoxBlinc基因在小鼠中的表達(dá)增強(qiáng)了HSC的自我更新，并擴(kuò)大了骨髓形成，導(dǎo)致AML樣疾病，與NPM1c/+小鼠中看到的表型相似。
單細(xì)胞核測(cè)序能夠獲得組織的細(xì)胞圖譜.重慶標(biāo)書整體服務(wù)
circ_0072083 敲低降低了 TMZ 抗性
神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的 TMZ 抗性為了研究circ_0072083對(duì)TMZ抗性的作用，用sh-circ_0072083或sh-NC 轉(zhuǎn)染U251/TR和U87/TR細(xì)胞。用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的sh-circ_0072083是基于具有比較高敲低效率的si-circ_0072083#1序列構(gòu)建的。sh-circ的轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)U251/TR 和 U87/TR 細(xì)胞中circ_0072083 水平降低 65% 以上。circ_0072083 敲低明顯降低了 U251/TR 和 U87/TR 細(xì)胞中TMZ的IC50。接下來(lái)，在用TMZ (50 μg/mL) 處理的細(xì)胞中進(jìn)行功能分析。在TMZ存在的情況下，circ_0072083沉默通過(guò)降低增殖和集落形成的能力顯著抑制細(xì)胞增殖。此外，在TMZ存在下，circ_0072083干擾明顯增加了U251/TR和U87/TR細(xì)胞的凋亡。此外，敲低circ_0072083顯著削弱了通過(guò)TMZ攻擊的兩種細(xì)胞系的遷移和侵襲能力。此外，在異種移植模型中研究了 circ_0072083對(duì) TMZ 功效的影響。用sh-circ_0072083或sh-NC轉(zhuǎn)染U251/TR細(xì)胞建立異種移植模型，然后用TMZ（20mg/kg）或PBS處理小鼠。與 sh-NC + TMZ 組相比，sh-circ + TMZ 組的**體積和重量明顯減少。此外，與 sh-NC + TMZ 組相比，sh-circ_0072083 + TMZ 組中的 circ_0072083 豐度顯著降低。這些結(jié)果表明，circ_0072083 沉默減弱了膠質(zhì)瘤中的 TMZ 抗性。 重慶標(biāo)書整體服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請(qǐng)：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)