冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在RNA捕獲、文庫(kù)構(gòu)建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上，通過(guò)甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進(jìn)行透化處理，使細(xì)胞中的mRNA釋放，并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，從而獲取基因表達(dá)信息?？傮w來(lái)說(shuō)，空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫(kù)-上機(jī)測(cè)序，而需要客戶進(jìn)行樣本準(zhǔn)備的步驟相對(duì)簡(jiǎn)單：組織凍存與OCT包埋。分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)中也有一些集 中于探究單細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。合肥single ce...

基因測(cè)序是基因檢測(cè)的方法之一，其又叫基因譜測(cè)序，是國(guó)際上公認(rèn)的一種基因檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次顛覆性的改變，一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條核酸序列進(jìn)行測(cè)定，被稱為下一代測(cè)序技術(shù)(nextgenerationsequencing)，足見(jiàn)其劃時(shí)代的改變，同時(shí)高通量測(cè)序使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為可能，所以又被稱為深度測(cè)序(deepsequencing)?；驕y(cè)序相關(guān)產(chǎn)品和技術(shù)已由實(shí)驗(yàn)室研究逐漸演變到臨床應(yīng)用，可以說(shuō)，基因測(cè)序技術(shù)將是下一個(gè)改變世界的技術(shù)。首先 出現(xiàn)的單細(xì)胞多組學(xué)方法就是將轉(zhuǎn)錄組與其他組學(xué)技術(shù)結(jié)合。深圳烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展解...

單細(xì)胞技術(shù)讓我們?cè)诨蚪M學(xué)、表觀基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等層面上解析了許多錯(cuò)綜復(fù)雜的生命密碼。隨著科技的進(jìn)步，我們發(fā)現(xiàn)整合多個(gè)組學(xué)的信息可以更仔細(xì)地觀察細(xì)胞之間的可變性，更清楚地識(shí)別特定細(xì)胞及其功能。單細(xì)胞多組學(xué)在臨床診斷、疾病分型以及細(xì)胞發(fā)展機(jī)制這些重大生命科學(xué)領(lǐng)域方面的應(yīng)用也將越來(lái)越廣。單細(xì)胞技術(shù)從 2009 年發(fā)展到現(xiàn)在，研究范圍不再局限于轉(zhuǎn)錄組，而是擴(kuò)展到了基因組、免疫組、表觀組、蛋白組等多組學(xué)水平。單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)(single-cell multimodal omics) 是指在同一細(xì)胞中同時(shí)測(cè)量多種組學(xué)數(shù)據(jù)的前沿技術(shù)。廈門(mén)single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)...

單細(xì)胞測(cè)序是指針對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，可精確地描述每一個(gè)細(xì)胞的狀態(tài)，在異質(zhì)性發(fā)育過(guò)程中具有不可忽視的應(yīng)用價(jià)值。然而，單細(xì)胞測(cè)序無(wú)法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息，對(duì)于揭示發(fā)育過(guò)程、病理微環(huán)境都存在很大的局限性。空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序以點(diǎn)陣形式記錄病理切片細(xì)胞的空間信息并進(jìn)行測(cè)序，可以精確指示點(diǎn)陣內(nèi)的全部基因表達(dá)情況。空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的加入，無(wú)疑讓單細(xì)胞測(cè)序如虎添翼，更精確地勾勒了組織水平的異質(zhì)性。，從多組學(xué)的角度對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行綜合分析 將是未來(lái)單細(xì)胞技術(shù)的必由之路。西安single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)服務(wù)機(jī)構(gòu)烈冰科技于2010年誕生之初便立足于高通量測(cè)序行業(yè)，為科研學(xué)者提供專注的...

當(dāng)下，單細(xì)胞測(cè)序已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種疾病發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵過(guò)程和事件，如疾病從輕癥病變向惡性的轉(zhuǎn)化、惡性向轉(zhuǎn)移病變的發(fā)展，以及疾病對(duì)多種藥物的反應(yīng)等等。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液，或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核，進(jìn)而對(duì)于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測(cè)序得到結(jié)果的技術(shù)，其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個(gè)問(wèn)題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會(huì)互相影響或者轉(zhuǎn)化么？免疫研究中，兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對(duì)關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及，這樣PDL1-PD1的關(guān)系會(huì)生效么？單一的轉(zhuǎn)錄本研究不能體現(xiàn)生命進(jìn)程的變化，因此多組學(xué)聯(lián)合分析成為解析生命...

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是在單細(xì)胞水平上高通量測(cè)序分析基因表達(dá)譜的技術(shù)，突破傳統(tǒng)高通量測(cè)序的局限性，組織解離后，單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個(gè)細(xì)胞，基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫(kù)測(cè)序，獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài)，并鑒定細(xì)胞的類型，可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10XGenomicsChromiumX平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了單塊chip上的百萬(wàn)級(jí)別通量的細(xì)胞捕獲，系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)16個(gè)通道同時(shí)運(yùn)行，每個(gè)通道可捕獲2000-20000個(gè)細(xì)胞（不混樣），并支持原ChromiumController體統(tǒng)外的多種細(xì)胞捕獲百萬(wàn)級(jí)別通量實(shí)驗(yàn)，可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類...

烈冰科技于2010年誕生之初便立足于高通量測(cè)序行業(yè)，為科研學(xué)者提供專注的測(cè)序數(shù)據(jù)分析服務(wù)，先后經(jīng)歷基因芯片時(shí)代、基因測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序時(shí)代...在科技日新月異的洪流中始終獨(dú)占鰲頭。2018年以來(lái)，單細(xì)胞測(cè)序進(jìn)入發(fā)展的快車道，烈冰作為國(guó)內(nèi)首批引進(jìn)單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)雙平臺(tái)的公司，依托自主研發(fā)的NovelBrain?生物大數(shù)據(jù)分析平臺(tái)，為用戶提供一站式全流程的單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)和解決方案。4年的單細(xì)胞技術(shù)的積累，烈冰已具備大鼠、小鼠、斑馬魚(yú)、猴、裸鼴鼠、水稻、擬南芥等10+物種，皮膚、腦、胰腺、脂肪、心臟、花序等50+組織類型，100+細(xì)胞類型，1000+靶標(biāo)基因，10000+樣本處理經(jīng)驗(yàn)。利用單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)能...

空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可以用單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析策略進(jìn)行分析，例如，利用GO和Pathway分析篩選不同發(fā)育時(shí)期特定空間區(qū)域內(nèi)的信號(hào)通路及其關(guān)鍵基因的較大情況，揭示在特定發(fā)育時(shí)期特定區(qū)域內(nèi)發(fā)生的生物學(xué)過(guò)程。針對(duì)任何一個(gè)基因，空間轉(zhuǎn)錄組可以顯示表達(dá)該基因的點(diǎn)陣及其空間排布；單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組可以給出該基因表達(dá)的細(xì)胞類群；原位測(cè)序可以給出該基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)狀況。通過(guò)不同發(fā)育時(shí)間點(diǎn)的信息比較，可以分析細(xì)胞類群在某個(gè)部位在不同時(shí)間點(diǎn)的差異，給出其在細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)的演變狀況。單細(xì)胞多組學(xué)可從整體層面快速有效地探尋疾病發(fā)生、發(fā)展的根本原因或藥物作用靶點(diǎn)等信息。BD單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序服務(wù)相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞...

針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、測(cè)序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)：由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中，并且測(cè)序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此，我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)過(guò)濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10×Genomics為例，細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過(guò)分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn)，當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候，結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過(guò)濾。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候，選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn)；否則，選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量非常接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因...

當(dāng)下，單細(xì)胞測(cè)序已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種疾病發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵過(guò)程和事件，如疾病從輕癥病變向惡性的轉(zhuǎn)化、惡性向轉(zhuǎn)移病變的發(fā)展，以及疾病對(duì)多種藥物的反應(yīng)等等。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液，或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核，進(jìn)而對(duì)于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測(cè)序得到結(jié)果的技術(shù)，其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個(gè)問(wèn)題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會(huì)互相影響或者轉(zhuǎn)化么？免疫研究中，兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對(duì)關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及，這樣PDL1-PD1的關(guān)系會(huì)生效么？單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)可在同一細(xì)胞中捕獲分析兩種以上的組學(xué)信息,包括轉(zhuǎn)錄組、...

如在現(xiàn)有研究方法基礎(chǔ)上，進(jìn)行特定亞細(xì)胞區(qū)域的蛋白質(zhì)組學(xué)、相互作用蛋白質(zhì)組學(xué)以及某種特定翻譯后修飾類型的蛋白質(zhì)組學(xué)的研究等。這將有助于諸多生化過(guò)程以及致病機(jī)理的全新認(rèn)識(shí)與發(fā)現(xiàn)。隨著基于單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜研究方法的不斷發(fā)展，單細(xì)胞分析方法的靈敏度、蛋白質(zhì)的覆蓋度、細(xì)胞通量、空間分辨率以及多組學(xué)的兼容能力會(huì)不斷突破我們的認(rèn)知極限。更重要的是，單細(xì)胞分析在臨床診斷、疾病分型以及細(xì)胞發(fā)展機(jī)制這些重大生命科學(xué)領(lǐng)域方面的應(yīng)用將會(huì)越來(lái)越大。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次翻天覆地的改變，一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條核酸序列進(jìn)行測(cè)定。北京single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)當(dāng)蜂巢孔內(nèi)同時(shí)落入細(xì)胞和磁珠...

多樣本數(shù)據(jù)合并：FractionofReadsKept：合并樣本時(shí)，各樣本根據(jù)MappedBarcodedReadsperCell數(shù)量計(jì)算出來(lái)的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大，需要進(jìn)行Downsample處理，以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準(zhǔn)將不同樣本中細(xì)胞測(cè)序深度標(biāo)化到同一水平，從而避免因測(cè)序深度差異導(dǎo)致的基因檢測(cè)數(shù)量、基因表達(dá)水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺(tái)致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù)，深入解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果，深入挖掘其背后的生物學(xué)意義；從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究，加速科研進(jìn)程！深度的單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)解讀助力生物健康醫(yī)療時(shí)代。成都上海烈冰生...

隨著單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（scRNA-Seq）的蓬勃發(fā)展，其在在胚胎發(fā)育，腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性，免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)化等多方面屢建奇功，但是由于細(xì)胞形態(tài)的不同和單細(xì)胞制備中細(xì)胞敏感性的差異等因素影響，scRNA-Seq在數(shù)據(jù)分析時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞類型占比失真，個(gè)別細(xì)胞類型丟失等情況。為了克服單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的局限性，單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（snRNA-Seq）應(yīng)運(yùn)而生，snRNA-Seq可利用凍存組織直接制備單細(xì)胞核進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，不僅克服了細(xì)胞形態(tài)差異致使的細(xì)胞捕獲差異，還克服了單細(xì)胞測(cè)序必須使用新鮮樣本的多個(gè)局限性。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測(cè)序服務(wù)。成都烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)單細(xì)胞技術(shù)讓我們...

單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)（SingleCellSequencing）從一種新興的研究角度，借助已有的高通量測(cè)序手段，幫助研究者在疾病樣本的異質(zhì)性、樣本微環(huán)境、發(fā)育學(xué)、免疫學(xué)以及其他領(lǐng)域中進(jìn)行單細(xì)胞層面的數(shù)據(jù)解析，解決了BulkPopulationSequencing所無(wú)法解決的問(wèn)題。這樣一個(gè)新的研究領(lǐng)域必然也需要足夠可靠的實(shí)驗(yàn)手段來(lái)支撐。BDRhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng)為此提供了完善的硬件設(shè)備，保證了從單細(xì)胞懸液質(zhì)量評(píng)估到單細(xì)胞分選標(biāo)記過(guò)程中每一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟的完善質(zhì)控。NovelBio單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)借助BDRhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng)，在實(shí)驗(yàn)實(shí)施層面對(duì)單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果的可靠性提供了強(qiáng)有力的保證。繼單細(xì)胞...

相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問(wèn)題，10X平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測(cè)序細(xì)胞量，這個(gè)量級(jí)的測(cè)序細(xì)胞量已經(jīng)可以說(shuō)能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型。因此，這兩種技術(shù)對(duì)于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上，無(wú)論是從細(xì)胞數(shù)量上來(lái)說(shuō)還是表達(dá)檢測(cè)可靠性來(lái)說(shuō)，都會(huì)更實(shí)用。同時(shí)依托Random Cell Label技術(shù)，使得其對(duì)于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對(duì)于Smart-Seq數(shù)據(jù)來(lái)說(shuō)，影響幾乎可以忽略不計(jì)（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測(cè)試結(jié)果，顯示...

對(duì)于單細(xì)胞測(cè)序而言，常常需要先構(gòu)建細(xì)胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開(kāi)展后續(xù)各項(xiàng)分析，并且數(shù)據(jù)分析時(shí)以細(xì)胞聚類（cell cluster）為討論對(duì)象，而不是像常規(guī)Bulk測(cè)序一樣以組別為分析對(duì)象，因此單細(xì)胞測(cè)序項(xiàng)目對(duì)樣本入組要求沒(méi)有Bulk測(cè)序那樣嚴(yán)格，但是單細(xì)胞測(cè)序，特別是目的為圖譜研究時(shí)，需要通過(guò)提高樣本復(fù)雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細(xì)胞圖譜信息。因此，單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)時(shí)首先需要保證生物學(xué)重復(fù)，不同樣本來(lái)源的樣本建議單獨(dú)進(jìn)行細(xì)胞解離和捕獲、建庫(kù)、測(cè)序，以保證捕獲到足夠的細(xì)胞數(shù)，單個(gè)樣本分別捕獲細(xì)胞時(shí)，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準(zhǔn)確性。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄...

隨著單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（scRNA-Seq）的蓬勃發(fā)展，其在在胚胎發(fā)育，腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性，免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)化等多方面屢建奇功，但是由于細(xì)胞形態(tài)的不同和單細(xì)胞制備中細(xì)胞敏感性的差異等因素影響，scRNA-Seq在數(shù)據(jù)分析時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞類型占比失真，個(gè)別細(xì)胞類型丟失等情況。為了克服單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的局限性，單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（snRNA-Seq）應(yīng)運(yùn)而生，snRNA-Seq可利用凍存組織直接制備單細(xì)胞核進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，不僅克服了細(xì)胞形態(tài)差異致使的細(xì)胞捕獲差異，還克服了單細(xì)胞測(cè)序必須使用新鮮樣本的多個(gè)局限性。分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)大多數(shù)以轉(zhuǎn)錄 組測(cè)序?yàn)橹攸c(diǎn)。南京烈冰單細(xì)胞多組學(xué)平臺(tái)烈冰科技自主...

如在現(xiàn)有研究方法基礎(chǔ)上，進(jìn)行特定亞細(xì)胞區(qū)域的蛋白質(zhì)組學(xué)、相互作用蛋白質(zhì)組學(xué)以及某種特定翻譯后修飾類型的蛋白質(zhì)組學(xué)的研究等。這將有助于諸多生化過(guò)程以及致病機(jī)理的全新認(rèn)識(shí)與發(fā)現(xiàn)。隨著基于單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜研究方法的不斷發(fā)展，單細(xì)胞分析方法的靈敏度、蛋白質(zhì)的覆蓋度、細(xì)胞通量、空間分辨率以及多組學(xué)的兼容能力會(huì)不斷突破我們的認(rèn)知極限。更重要的是，單細(xì)胞分析在臨床診斷、疾病分型以及細(xì)胞發(fā)展機(jī)制這些重大生命科學(xué)領(lǐng)域方面的應(yīng)用將會(huì)越來(lái)越大。功能研究型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)結(jié)合了CRISPR基因編輯技術(shù), 深度挖掘基因表達(dá)調(diào)控與細(xì)胞功能。成都scRNA單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激，其細(xì)胞會(huì)從一種功能...

未來(lái),單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,一方面將集中在對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)化和新方法的開(kāi)發(fā).現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)化不僅包括建庫(kù)手段、測(cè)序技術(shù)和算法工具等方面,還包括優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)流程以及提升實(shí)驗(yàn)效率.為了更好地檢測(cè)到各種大分子的特征,研究者可以考慮從生物、化學(xué)和物理等多學(xué)科中尋找解決方案.此外,新的計(jì)算方法和分析工具能幫助研究者越過(guò)一些實(shí)驗(yàn)限制,發(fā)現(xiàn)更多新奇的生物過(guò)程.例如,擬時(shí)序分析(pseudotimetrajectory)將有助于人們理解早期胚胎發(fā)育的細(xì)胞分化軌跡.新方法則可以更多地關(guān)注目前未能檢測(cè)到的一些重要的基因表達(dá)調(diào)控層面,如DNA三維結(jié)構(gòu)、非編碼RNA和胞內(nèi)蛋白等.另一方面,目前的單細(xì)胞多...

RNA測(cè)序（RNA-seq）是轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的重要工具，也是生命科學(xué)領(lǐng)域常用的技術(shù)之一。相比于傳統(tǒng)通路研究低維度、低通量的局限性，轉(zhuǎn)錄組學(xué)有以下優(yōu)勢(shì)：1）能夠動(dòng)態(tài)考察細(xì)胞基因組的表達(dá)，多維度地反映差異變化；2）可用于研究占RNA絕大部分的非編碼RNA，研究其結(jié)構(gòu)以及在細(xì)胞生命活動(dòng)中的重要調(diào)控作用；3）與蛋白組學(xué)研究相互補(bǔ)充，多角度呈現(xiàn)細(xì)胞水平的變化信息。作為轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的技術(shù)基礎(chǔ)，RNA測(cè)序技術(shù)也在不斷地更新迭代，現(xiàn)如今更大通量、更深精度的測(cè)序?yàn)楸姸嗫蒲泻歪t(yī)學(xué)工作者提供了豐富的工具和探索真理的手段。單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)可在同一細(xì)胞中捕獲分析兩種以上的組學(xué)信息,包括轉(zhuǎn)錄組、基因組、表觀基因組、蛋白組等...

當(dāng)下，單細(xì)胞測(cè)序已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種疾病發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵過(guò)程和事件，如疾病從輕癥病變向惡性的轉(zhuǎn)化、惡性向轉(zhuǎn)移病變的發(fā)展，以及疾病對(duì)多種藥物的反應(yīng)等等。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液，或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核，進(jìn)而對(duì)于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測(cè)序得到結(jié)果的技術(shù)，其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個(gè)問(wèn)題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會(huì)互相影響或者轉(zhuǎn)化么？免疫研究中，兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對(duì)關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及，這樣PDL1-PD1的關(guān)系會(huì)生效么？烈冰科技已建立了基于單細(xì)胞測(cè)序的高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)多平臺(tái)。西安烈冰科技單細(xì)...

隨著單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（scRNA-Seq）的蓬勃發(fā)展，其在在胚胎發(fā)育，腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性，免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)化等多方面屢建奇功，但是由于細(xì)胞形態(tài)的不同和單細(xì)胞制備中細(xì)胞敏感性的差異等因素影響，scRNA-Seq在數(shù)據(jù)分析時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞類型占比失真，個(gè)別細(xì)胞類型丟失等情況。為了克服單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的局限性，單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（snRNA-Seq）應(yīng)運(yùn)而生，snRNA-Seq可利用凍存組織直接制備單細(xì)胞核進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，不僅克服了細(xì)胞形態(tài)差異致使的細(xì)胞捕獲差異，還克服了單細(xì)胞測(cè)序必須使用新鮮樣本的多個(gè)局限性。以單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組為中心的多組學(xué)聯(lián)合分析有利于更好地理解基因變化與表型變化之間的關(guān)聯(lián)性。廣州sin...

對(duì)于單細(xì)胞測(cè)序而言，常常需要先構(gòu)建細(xì)胞圖譜，在此基礎(chǔ)上再開(kāi)展后續(xù)各項(xiàng)分析，并且數(shù)據(jù)分析時(shí)以細(xì)胞聚類（cell cluster）為討論對(duì)象，而不是像常規(guī)Bulk測(cè)序一樣以組別為分析對(duì)象，因此單細(xì)胞測(cè)序項(xiàng)目對(duì)樣本入組要求沒(méi)有Bulk測(cè)序那樣嚴(yán)格，但是單細(xì)胞測(cè)序，特別是目的為圖譜研究時(shí)，需要通過(guò)提高樣本復(fù)雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細(xì)胞圖譜信息。因此，單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)時(shí)首先需要保證生物學(xué)重復(fù)，不同樣本來(lái)源的樣本建議單獨(dú)進(jìn)行細(xì)胞解離和捕獲、建庫(kù)、測(cè)序，以保證捕獲到足夠的細(xì)胞數(shù)，單個(gè)樣本分別捕獲細(xì)胞時(shí)，后續(xù)分析除了整體分析以外，還可以做單樣本分析，保證分析的完備準(zhǔn)確性。單細(xì)胞多組...

reads數(shù)、基因表達(dá)量及細(xì)胞數(shù)量判定過(guò)程中：以捕獲5000個(gè)細(xì)胞、100G的測(cè)序量為標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)細(xì)胞的reads數(shù)大約在50k左右；每個(gè)細(xì)胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細(xì)胞類型，例如成熟的B，T，粒細(xì)胞數(shù)量較多的組織中，由于該類型細(xì)胞表達(dá)的基因數(shù)普遍較少，導(dǎo)致基因中位數(shù)下降。而某一疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細(xì)胞等，他們的基因表達(dá)數(shù)較高，甚至可以超過(guò)1萬(wàn)，這就導(dǎo)致該類樣本基因中位數(shù)非常高。因此，我們對(duì)細(xì)胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認(rèn)時(shí)，需要考察實(shí)際組織的細(xì)胞組成。單細(xì)胞多學(xué)可包括基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、影像組學(xué)。青島scRNA單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析可視化當(dāng)蜂巢孔內(nèi)同時(shí)落入細(xì)胞和磁珠后，接...

冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在RNA捕獲、文庫(kù)構(gòu)建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上，通過(guò)甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進(jìn)行透化處理，使細(xì)胞中的mRNA釋放，并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，從而獲取基因表達(dá)信息?？傮w來(lái)說(shuō)，空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫(kù)-上機(jī)測(cè)序，而需要客戶進(jìn)行樣本準(zhǔn)備的步驟相對(duì)簡(jiǎn)單：組織凍存與OCT包埋。目前已應(yīng)用的單細(xì)胞多組學(xué)聯(lián)合分析包括轉(zhuǎn)錄組和基因組，轉(zhuǎn)錄組和ＤＮＡ甲基化、轉(zhuǎn)錄組和蛋白組。上海scRNA單細(xì)胞多...

烈冰生信團(tuán)隊(duì)傾情研發(fā)的NovelBrain?生信大數(shù)據(jù)分析平臺(tái)，針對(duì)龐大的單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)，能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞類型鑒定的快、精、準(zhǔn)：一鍵導(dǎo)入genelist構(gòu)建個(gè)性化基因列表；輕松一點(diǎn)即可展示Marker基因的Featureplot；任意修改Cluster的顏色和名稱助力高效鑒定細(xì)胞類型；一鍵獲得t-SNE圖、Heatmap和Violin圖：輕松獲得并下載基因表達(dá)的t-SNE圖、Heatmap、Violin圖，還可以通過(guò)調(diào)節(jié)寬、高和系數(shù)比例來(lái)調(diào)節(jié)美觀。平臺(tái)上線300+task自主分析工具、50+pipeline工作流模板，幫助烈冰生信分析團(tuán)隊(duì)和自主分析用戶實(shí)現(xiàn)分析工具和模板的快速調(diào)用和一站式全流程自動(dòng)...

相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問(wèn)題，10X平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測(cè)序細(xì)胞量，這個(gè)量級(jí)的測(cè)序細(xì)胞量已經(jīng)可以說(shuō)能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型。因此，這兩種技術(shù)對(duì)于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上，無(wú)論是從細(xì)胞數(shù)量上來(lái)說(shuō)還是表達(dá)檢測(cè)可靠性來(lái)說(shuō)，都會(huì)更實(shí)用。同時(shí)依托Random Cell Label技術(shù)，使得其對(duì)于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對(duì)于Smart-Seq數(shù)據(jù)來(lái)說(shuō)，影響幾乎可以忽略不計(jì)（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測(cè)試結(jié)果，顯示...

基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴(kuò)增成千上萬(wàn)倍，保證過(guò)程中足夠的測(cè)序深度。測(cè)序時(shí)使用特殊標(biāo)記的dNTP：1）堿基上通過(guò)敏感鍵修飾上不同的熒光基團(tuán)，用于區(qū)分ATCG；2）3端使用疊氮基團(tuán)封閉，保證一次循環(huán)只上一個(gè)dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時(shí)，會(huì)通過(guò)高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團(tuán)和疊氮基團(tuán)，開(kāi)啟下一循環(huán)。通過(guò)分析讀取同一位點(diǎn)的熒光，實(shí)時(shí)獲取模版鏈的堿基序列。由于過(guò)程中使用的化學(xué)反應(yīng)并不可控，隨著循環(huán)數(shù)的增大會(huì)出現(xiàn)不同步的情況，因此Illumina的讀長(zhǎng)只能限制在200bp左右。單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)已應(yīng)用于心肌再生領(lǐng)域。成都single cell 單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析可視...

RNA測(cè)序（RNA-seq）是轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的重要工具，也是生命科學(xué)領(lǐng)域常用的技術(shù)之一。相比于傳統(tǒng)通路研究低維度、低通量的局限性，轉(zhuǎn)錄組學(xué)有以下優(yōu)勢(shì)：1）能夠動(dòng)態(tài)考察細(xì)胞基因組的表達(dá)，多維度地反映差異變化；2）可用于研究占RNA絕大部分的非編碼RNA，研究其結(jié)構(gòu)以及在細(xì)胞生命活動(dòng)中的重要調(diào)控作用；3）與蛋白組學(xué)研究相互補(bǔ)充，多角度呈現(xiàn)細(xì)胞水平的變化信息。作為轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的技術(shù)基礎(chǔ)，RNA測(cè)序技術(shù)也在不斷地更新迭代，現(xiàn)如今更大通量、更深精度的測(cè)序?yàn)楸姸嗫蒲泻歪t(yī)學(xué)工作者提供了豐富的工具和探索真理的手段。單細(xì)胞測(cè)序手段有力地解決了組織內(nèi)高度異質(zhì)性對(duì)于低豐度信號(hào)影響的問(wèn)題。無(wú)錫高通量測(cè)序單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)...

空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的數(shù)據(jù)分析基本分為三個(gè)階段：1.數(shù)據(jù)的預(yù)處理部分；2.Spot點(diǎn)陣的分群與定義；3.Spot分群的功能與生物學(xué)價(jià)值。每一個(gè)部分都不可或缺，其結(jié)果都對(duì)后續(xù)的分析結(jié)果有重要影響。由于空間轉(zhuǎn)錄組的序列結(jié)構(gòu)與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的左端序列結(jié)構(gòu)是非常接近的，都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕獲區(qū)域這樣的設(shè)計(jì)。右端普遍為捕獲的RNA序列。因此采用單細(xì)胞的原始數(shù)據(jù)過(guò)濾策略即可，左端可以考慮切下捕獲區(qū)域前的序列區(qū)域作為后續(xù)分析用的序列以減少分析負(fù)荷。隨后，采用10X官方的Spatialranger的策略進(jìn)行后續(xù)分析，解析出位于空間位置中的有效的Spot表達(dá)矩陣。單細(xì)胞多組...