黑龍江Ham's F12培養(yǎng)基哪個好

來源: 發(fā)布時間:2024-09-29

    另外,酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過程中會造成干擾,并且具有一定的固醇類***樣作用,如雌***樣作用。當(dāng)用于哺乳類動物細(xì)胞的培養(yǎng),可能會發(fā)生一些固醇類反應(yīng)?,F(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測技術(shù),生物反應(yīng)器培養(yǎng)動物細(xì)胞時,酚紅可完全去除。細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動物細(xì)胞時,細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷,除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外,可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì),常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇(PEG)、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活,還要分裂增殖,合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。動物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,適宜pH在~。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計來測定。在細(xì)胞生長過程中,隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強(qiáng)。MEM培養(yǎng)基適用于多種哺乳動物細(xì)胞。黑龍江Ham's F12培養(yǎng)基哪個好

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    維持15-20分鐘,可殺滅所有的繁殖體和芽胞。本法適用于耐高溫、耐濕物品的**,如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。(二)下向主要介紹高壓蒸氣**器**效果的驗(yàn)證方法高壓蒸氣**器使物品**后達(dá)到無菌要求,這是**實(shí)驗(yàn)中的基本保證。高壓**器**效果是否合格足實(shí)驗(yàn)成敗的**基礎(chǔ)**關(guān)鍵的首要步驟。除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解,不需高壓**外,大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓**15-30分鐘。尤其是對無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基**不徹底,直接關(guān)系到對**的無菌試驗(yàn)結(jié)果。因此必須認(rèn)真對高壓**器進(jìn)行**效果的驗(yàn)證。為此我們提供了進(jìn)行**效果驗(yàn)證的一個簡易可行的方法。1.試驗(yàn)材料(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillusstearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌,含芽胞量5-lO5CFU/片。(2)121℃壓力蒸氣**化學(xué)指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓**20分鐘后備用。(4)O—150℃留點(diǎn)溫度計。2.方法與結(jié)果將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片(以下簡稱菌片)用無菌鑷子放人密封試管中?;瘜W(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓**器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如**器為二層,則需放10處。內(nèi)蒙古減血清培養(yǎng)基常見問題MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。

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    微量元素在細(xì)胞內(nèi)通常以與有機(jī)物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細(xì)胞中參與氧的轉(zhuǎn)運(yùn);鈷是維生素B12的組成部分,參與葉酸的合成和脂肪酸的合成;鎳能夠***脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細(xì)胞內(nèi)具有重要功能的酶,還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能;亞硒酸鈉中的硒,作為谷胱甘肽過氧化物酶的輔基,具有抗過氧化物能力,參與消除細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸過氧化物,提高細(xì)胞的生長速率和活性。在低血清、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中,為滿足細(xì)胞生長增殖需要,常常添加一些成份:蛋白質(zhì)、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、脂類、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用,動物細(xì)胞對許多物質(zhì)(難溶于水的離子或脂類物質(zhì))的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用,如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、***、礦物質(zhì)等促進(jìn)細(xì)胞生長。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白,能夠結(jié)合鐵,促進(jìn)細(xì)胞對鐵離子的吸收,并具有***作用,其促生長作用可能與其具有生長因子的功能有關(guān)。胰島素可促進(jìn)細(xì)胞對葡萄糖和氨基酸的利用,商業(yè)化中一些生長因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中,主要用來刺激細(xì)胞增殖,并可促進(jìn)糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細(xì)胞生長的化合物,是腦磷酸的合成前提。

    3)培養(yǎng)方法:將配制的1/2cs生長培養(yǎng)基分裝于長、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,用移液槍吸取帶有無菌水的無菌種子,吹打在無菌濾紙上,用無菌尖頭鑷子將種子均勻點(diǎn)播在培養(yǎng)基上;于溫度22-24℃、濕度50-70%、光照強(qiáng)度1500-2000lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:哥倫比亞型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)16d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯,蓮座葉均已伸展,葉色濃綠,根系發(fā)達(dá)、平均主根長為。如圖1所示。對比培養(yǎng)例1:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實(shí)例1,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:哥倫比亞型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)16d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯,蓮座葉部分伸展,葉色濃綠,根系發(fā)達(dá)、平均主根長為。如圖1所示。培養(yǎng)實(shí)例1和對比培養(yǎng)例1的培養(yǎng)結(jié)果比較:哥倫比亞型擬南芥在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%;在相同條件下培養(yǎng)16d時,與1/2ms生長培養(yǎng)基相比,1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳,主要表現(xiàn)為蓮座葉長勢更好、根系更為發(fā)達(dá)。如圖1所示。F12培養(yǎng)基適用于基因編輯和轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

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    又能使培養(yǎng)基的破壞降低至比較低的工藝條件。許多實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,培養(yǎng)基在高溫**的過程中,其營養(yǎng)成分的破壞在很大程度上可以用一級反應(yīng)來描述其反應(yīng)速度:式中—表示營養(yǎng)成分破環(huán)的速率,C:表示營養(yǎng)成分的濃度K':為反應(yīng)速度常數(shù),1/s,應(yīng)速度常數(shù)K'與溫度的關(guān)系,可以使用阿累尼烏斯公式表示之:K'=A'exp-△E'/RT……(1)式中——:反應(yīng)速度常數(shù),1/S:反應(yīng)的活化能(J/mol)R:氣體常數(shù),*J/mol*kT:反應(yīng)的***溫度,k同樣,**過程中的反應(yīng)速度常數(shù)也可以用下式表示出:K=A×exp[-E/RT]……(2)(1)、(2)式可以改寫成下列形式:lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……(3)lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……(4)(3)(4)的意義是指:反應(yīng)的溫度從T1升高到T2,其反應(yīng)的速度常數(shù)分別從k,1增加到k,2;k1增加到k2;培養(yǎng)基的**過程實(shí)際上是營養(yǎng)成分破壞、菌體死亡的兩個平行性反應(yīng),對于平行性反應(yīng),反應(yīng)溫度的提高,其兩個平行性反應(yīng)的速度常數(shù)都增加,但增加的幅度(大小)卻不同,其比值可以表示為:lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)實(shí)驗(yàn)證明:營養(yǎng)成分為破壞的反應(yīng)的活化能E的值為E,=—*103J/mol;而菌體死亡的活化能E芽孢:E=418*103J/mol。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。重慶無血清培養(yǎng)基價格

RPMI1640培養(yǎng)基提高了細(xì)胞的存活率和生長速率。黑龍江Ham's F12培養(yǎng)基哪個好

    K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液,細(xì)胞內(nèi)K+對于***某些酶是必需的,并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+在細(xì)胞外液中的作用是將**內(nèi)部細(xì)胞之間相互粘著,在細(xì)胞內(nèi)參與許多重要的細(xì)胞生理活動,如傳導(dǎo)、參與肌肉細(xì)胞收縮等。在懸浮培養(yǎng)時,為了減少細(xì)胞的聚集和附著,要減少Ca2+的濃度。Mg2+是構(gòu)成細(xì)胞間質(zhì)的重要成分,對于細(xì)胞間相互穩(wěn)定結(jié)合有很重要的意義。磷的化合物對細(xì)胞物質(zhì)代謝和生理功能調(diào)控有重要作用。其他成分:肽、核苷、嘌呤等??蓭椭?xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長。分類低血清細(xì)胞培養(yǎng)基概述營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基是維持細(xì)胞活性及高密度生長的基礎(chǔ),營養(yǎng)缺乏容易引起細(xì)胞凋亡,新生牛血清中所含大部分營養(yǎng)成分可以通過化學(xué)成分明確的營養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸維生素等成分組合取代。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分大優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,*需添加1%~5%新生牛血清,而對細(xì)胞生長、增殖、形態(tài)、活性和功能沒有影響甚至有所改善。在國外低血清培養(yǎng)基早已有之,如Gibco等。但是他們的低血清培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中選擇性的加入重組胰島素(recombinantinsulin)、人源轉(zhuǎn)鐵蛋白(human(holo)tran-sferrin)以及牛血清白蛋白等,有些還包含一些生長因子。黑龍江Ham's F12培養(yǎng)基哪個好