3)擬南芥葉片愈傷**的誘導(dǎo)方法:用手術(shù)剪刀剪開(kāi)長(zhǎng)勢(shì)良好的無(wú)菌葉片,用鑷子將其取出擺放在步驟(1)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,使傷口接觸培養(yǎng)基;于溫度23-25℃、濕度50-70%、光照強(qiáng)度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間16h、黑暗時(shí)間8h)條件下培養(yǎng)。(4)擬南芥根愈傷**的誘導(dǎo)方法:用鑷子取出無(wú)菌苗的根,用手術(shù)剪刀剪開(kāi)后平鋪于步驟(2)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培養(yǎng)條件同步驟(3)。(5)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí),培養(yǎng)6-8d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**,培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團(tuán)塊狀愈傷**,顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100%;擬南芥根愈傷**誘導(dǎo)時(shí),培養(yǎng)5-7d在切口處開(kāi)始出現(xiàn)少量顆粒狀愈傷**,培養(yǎng)20-22d獲得較大體積的淡黃色松脆型愈傷**,且在愈傷**周?chē)^察到大量致密分布的白毛,顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100%。如圖5所示。對(duì)比培養(yǎng)例5:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實(shí)例5,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí),培養(yǎng)7-10d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**,培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團(tuán)塊狀愈傷**,顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100%。無(wú)血清培養(yǎng)基提供了無(wú)血清的純凈環(huán)境。山東MEM a培養(yǎng)基哪個(gè)好
將蒸過(guò)的原料置于室溫下過(guò)夜,未被殺死的孢子便發(fā)芽生長(zhǎng),芽孢發(fā)育成營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,再30min便可殺死。如此連續(xù)反復(fù)進(jìn)行2-3次,亦可達(dá)到徹底**的目的。3、分批**的操作分批滅歇是在所用的發(fā)酵罐或其他培養(yǎng)裝置中進(jìn)行的,它是在配制罐中配好培養(yǎng)基后,通過(guò)**管道輸入發(fā)酵罐等培養(yǎng)設(shè)備中,然后開(kāi)始**。在進(jìn)行培養(yǎng)基的間歇**之前,通常先將發(fā)酵罐等培養(yǎng)裝置的分空氣過(guò)濾器進(jìn)行**,并且用空氣將分過(guò)濾器吹干。開(kāi)始**時(shí),應(yīng)先放去夾套或蛇管中的冷水,開(kāi)啟排氣管閥,通過(guò)空氣管向發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基通入蒸汽進(jìn)行加熱,同時(shí),也可在夾套內(nèi)通蒸汽進(jìn)行間接加熱。當(dāng)培養(yǎng)基溫度升到70℃左右時(shí),從取樣管和放料管向罐內(nèi)通入蒸汽進(jìn)一步加熱,當(dāng)溫度升至120℃,罐壓為1*105Pa(表壓)時(shí),打開(kāi)接種、補(bǔ)料、消泡劑、酸、堿等管道閥門(mén)進(jìn)行排汽,當(dāng)然在保溫過(guò)程中,應(yīng)注意凡在培養(yǎng)基液面下的各種進(jìn)口管道都應(yīng)通入蒸汽,而在液面以上的其余各管道則應(yīng)排放蒸汽,這樣才能不留死角,從而保證**徹底。保溫結(jié)束后,依次關(guān)閉各排汽、進(jìn)汽閥門(mén),待罐內(nèi)壓力低于空氣壓力后,向罐內(nèi)通入無(wú)菌空氣,在夾套或蛇管中通冷水降溫,使培養(yǎng)基的溫度降到所需的溫度,進(jìn)行下一步的發(fā)酵和培養(yǎng)。山東MEM a培養(yǎng)基哪個(gè)好使用減血清培養(yǎng)基能減少實(shí)驗(yàn)中的血清干擾。
平衡鹽溶液(balancedsaltsolution,BSS)簡(jiǎn)稱鹽溶液,集緩沖液的緩沖能力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)特點(diǎn)于一體,兼具維持滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、同時(shí)供給細(xì)胞生存所必需的能量和無(wú)機(jī)離子成分的作用。各種BSS的緩沖系統(tǒng)有所不同,其中以Hank’s液和Earle’s液為例,它們主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,溶液會(huì)變堿,Hank’s液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存**,需要用Earle’s液,。如果**是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的**,用Hank’s液就可以了。表3-1幾種常用的平衡鹽溶液配方(g/L)一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成分,同時(shí)參與許多重要的細(xì)胞功能活動(dòng)。但它們有使細(xì)胞凝集的作用,在配制分散細(xì)胞的消化液和特殊用途的細(xì)胞洗滌時(shí),宜采用Ca2+、Mg2+含量較低的Dulbecco液或無(wú)Ca2+、Mg2+的D-Hanks液,或者PBS液。概述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。
但其引入的尿素和**銨成分含量過(guò)高,這對(duì)多種植物生長(zhǎng)不利;cna一種植物**培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基及cna一種無(wú)nh4no3植物**培養(yǎng)用培養(yǎng)基分別公開(kāi)了一種無(wú)硝酸培養(yǎng)基,獲得較好的培養(yǎng)效果,但新引入的硝酸鈣和硝酸鎂兩種成分均為易制爆試劑;cna一種植物組培**培養(yǎng)基公開(kāi)了一種無(wú)硝酸銨培養(yǎng)基,可提高植物組培成功率,但引入了易制爆試劑硝酸鈉,且其*適用于植物離體培養(yǎng),不具有通用性。此外,現(xiàn)有的植物**培養(yǎng)基,包括ms、b5、n6以及其他公開(kāi)的植物**培養(yǎng)基,它們被用于配制液體培養(yǎng)基時(shí)的ph值波動(dòng)大,在用于植物水培時(shí)均需要調(diào)節(jié)ph,過(guò)程繁瑣,耗費(fèi)時(shí)間。因此,急需一種既無(wú)硝酸銨、也不引入新的易制爆成分,并且培養(yǎng)效果與ms培養(yǎng)基相當(dāng)或優(yōu)于ms培養(yǎng)基的***適用于多種植物**培養(yǎng)的ph穩(wěn)定型培養(yǎng)基。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:有鑒于此,本發(fā)明的目的是提供一種在不額外引入易制爆成分的前提下,去除了市場(chǎng)禁止流通的易制爆成分nh4no3,且ph穩(wěn)定的***適用于多種植物**培養(yǎng)的植物基本培養(yǎng)基,以解決現(xiàn)有植物**培養(yǎng)基存在的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明廣適性植物**培養(yǎng)基,其每1000ml培養(yǎng)基中含有:kno32662mg、。無(wú)血清培養(yǎng)基為細(xì)胞培養(yǎng)提供了純凈的背景。
人工合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加一定量的血清使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。組成及作用氨基酸:組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同的細(xì)胞對(duì)氨基酸的需求各異,但幾種必需氨基酸細(xì)胞自身不能合成,必須依靠培養(yǎng)液提供,如組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、半胱氨酸、酪氨酸等。其余非必需氨基酸,細(xì)胞可以自己合成,或通過(guò)轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來(lái)。絕大部分細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求,因?yàn)楣劝滨0肥亲鳛槟茉醇疤荚次镔|(zhì)同時(shí)被細(xì)胞利用,是是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡,所以各種培養(yǎng)液中都含有較多的谷氨酰胺。細(xì)胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體,D型氨基酸不能被利用。維生素:維持細(xì)胞生長(zhǎng)的一種生物活性物質(zhì),對(duì)細(xì)胞代謝有重大作用。它們?cè)诩?xì)胞中大多形成酶的輔基或輔酶,沒(méi)有它們,酶便沒(méi)有活性,代謝活動(dòng)將無(wú)法進(jìn)行。維生素分為水溶和脂溶兩大類,的培養(yǎng)液中直接采用ATP和輔酶A。葡萄糖:大部分培養(yǎng)基都以葡萄糖作為能量來(lái)源之一。無(wú)機(jī)鹽:維持培養(yǎng)基滲透壓平衡,參與細(xì)胞的代謝活動(dòng)。主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+等。Na+是細(xì)胞外液中**主要的陽(yáng)離子,對(duì)維持滲透壓的恒定有決定性的作用。MEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長(zhǎng)所需的基本環(huán)境。湖南MEM a培養(yǎng)基有哪些
F12培養(yǎng)基適用于神經(jīng)細(xì)胞和其他敏感細(xì)胞系。山東MEM a培養(yǎng)基哪個(gè)好
此法由巴斯德創(chuàng)立,用于酒類消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有兩種:一種為℃加熱15秒,另一種為63-66℃加熱30分鐘。大多采用第一種方法。(2)煮沸法。在1個(gè)大氣壓下,水煮沸后溫度達(dá)100℃,煮沸5分鐘后可殺死一般**繁殖體。如于水中加入2%碳酸鈉,可將其沸點(diǎn)提高至105℃,既可促進(jìn)芽胞的殺滅,又可防止金屬器皿生銹。(3)流通蒸氣消毒法。又稱常壓蒸氣消毒法,常用附諾(Amold)流通蒸氣**器,利用1個(gè)大氣壓下100℃水蒸氣進(jìn)行消毒,10-30分鐘后**繁殖體被殺死,但對(duì)芽孢作用不大。(4)間歇**法(fractionalsterilization)。采用間歇方式達(dá)到**目的。將**物品置于阿諾流通蒸氣**器內(nèi),100℃加熱15-30分鐘,每日1次,連續(xù)3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱過(guò)夜,致殘存的芽胞發(fā)育成繁殖體,次日再通過(guò)流通蒸氣**器加熱而被殺滅。如此反復(fù),既可殺滅芽胞,又可使不耐高溫的物質(zhì)免受影響。若某些物質(zhì)不耐100攝氏度,則可將溫度下降至75-80℃,每次加熱時(shí)間延長(zhǎng)到30-60分鐘,常用血清凝固器對(duì)呂氏血清培養(yǎng)基和L-J培養(yǎng)基的**屬此方法。(5)高壓蒸氣火菌法。利用密閉的耐高壓蒸氣**器(autoclave),在蒸氣不外溢的條件下,使鍋內(nèi)壓力增高,隨之蒸氣溫度也增高。通常在℃。山東MEM a培養(yǎng)基哪個(gè)好