由于培養(yǎng)基的間歇**不需要專門的**設備,投資少,對設備要求簡單,對蒸汽的要求也比較低,且**效果可靠,因此,間歇**是中小型生產工廠經常采用的一種培養(yǎng)基**方法。(三)、培養(yǎng)基的連續(xù)**1、定義:連續(xù)**也叫連消,將配制好的并經預熱(60~75℃)的培養(yǎng)基用泵連續(xù)輸入由直接蒸汽加熱的加熱塔,使在短時間內達到**溫度(126~132℃)。然后進入維持罐(或維持管),使在**溫度下維持3~7分鐘后再進入冷卻管,使其冷卻至接種溫度并直接進入已事先**(空罐**)過的發(fā)酵罐內。其溫度一般以126~132℃為宜,總蒸汽壓力要求達到~MPa以上。培養(yǎng)基采用連續(xù)**時,需在培養(yǎng)基進入發(fā)酵罐前,直接用蒸汽進行空罐**(空消),用無菌空氣保壓,待培養(yǎng)基流入罐后,開始冷卻。**時對培養(yǎng)基的加熱可采用各種加熱器。培養(yǎng)基的冷卻方式有噴淋冷卻式、真空冷卻式、薄板換熱器式幾種方式,其過程均包括加熱、維持和冷卻階段。2、連續(xù)**的流程:(1)由熱交換器組成的**系統(tǒng)流程中采用了薄板換熱器作為培養(yǎng)液的加熱和冷卻器,蒸汽在薄板換熱器的加熱段使培養(yǎng)液的溫度升高,經維持段保溫一定時間后,培養(yǎng)基在薄板換熱器的冷卻段進行冷卻。無血清培養(yǎng)基為細胞培養(yǎng)提供了純凈的背景。廣東RPMI1640培養(yǎng)基包括
無芽孢:E=209—250*103J/mol。顯然,(5)式的比值〉1,說明提高溫度對于第二個平行反應,即菌體死亡的反應是有利的。提高溫度,雖然兩個平行性反應的反應速度常數都提高了,但是,達到同樣的**效果,所需要的時間卻縮短了,由于***個反應也就是營養(yǎng)成分破壞的反應速度常速增加的少,因此,有利于減少培養(yǎng)基在**過程中營養(yǎng)成分的破壞。換言之,高溫短時**對于培養(yǎng)基營養(yǎng)成分是有利的。通常所說的高溫短時**可以提高生產效益,其理論根據就在于此。結論1:當**溫度上升時,微生物殺死速率的提高要超過培養(yǎng)基成分的破壞速率的增加。要減少營養(yǎng)成分的破壞,可升高溫度**。結論2:在**時選擇較高的溫度、較短的時間,這樣便既可達到需要的**程度,同時又可減少營養(yǎng)物質的損失。(二)、影響**效果的因素(1)微生物種類:不同的微生物k值不同。(2)初始菌量:在保持N值不變的前提下,t與初始菌量N0的對數成正比。(3)培養(yǎng)基成份:油脂、蛋白質增加微生物的耐熱性。(4)傳熱與混合狀況:影響受熱均勻度。(5)培養(yǎng)基中固體顆粒的存在影響熱穿透。(6)蒸汽中空氣的存在降低蒸汽分壓和**溫度。(7)pH:酸性pH下可加快微生物熱死速率三、培養(yǎng)基的工業(yè)**。河南DMEM/F12培養(yǎng)基答疑解惑減血清培養(yǎng)基減少了血清對細胞的影響。
所描述的實施例**是本申請一部分實施例,而不是全部的實施例?;诒旧暾堉械膶嵤├?,本領域普通技術人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例,都應當屬于本發(fā)明保護的范圍。實施例1一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基,其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b;所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加,然后間隔24h添加發(fā)酵培養(yǎng)基b。所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,2-羥基乙胺40mg/l,cecl310mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;將各原料攪拌均勻后,調節(jié)ph為,121℃**15min,自然冷卻,制得發(fā)酵培養(yǎng)基a;所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸5g/l,尿素2g/l,殼聚糖80mg/l;將各原料攪拌均勻后,調節(jié)ph為,121℃**15min,自然冷卻,制得發(fā)酵培養(yǎng)基b;采用常規(guī)發(fā)酵工藝:將黃色短桿菌gdk-9按8%接種量將種子液(od600nm為)接入裝有60l發(fā)酵培養(yǎng)基a的100l發(fā)酵罐中進行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵培養(yǎng)24h,然后添加10l發(fā)酵培養(yǎng)基b,繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)24h,收集發(fā)酵液;整個發(fā)酵培養(yǎng)過程中,控制發(fā)酵溫度35℃,通風比1∶,攪拌轉速300r/min,溶氧維持在20%。
本發(fā)明涉及植物**培養(yǎng)技術領域,尤其是涉及一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法。背景技術:繡球(hydrangeamacrophylla)為虎耳草科繡球屬落葉灌木,別名八仙花、**花、粉團花、雪球花、草繡球等,是園林上應用***的觀賞植物。原產于我國長江流域及以南,自然株高2m。葉對生,倒卵或橢圓形,邊緣有鋸齒,傘房花序頂生,直徑20cm,近球形?;ㄉ嘧?,青白色,漸轉粉紅色,再轉紫紅色,花色美艷。其花色又常隨土壤的酸堿度而改變,土壤ph值4~6時,花色多呈藍色;ph值,則呈紅色。繡球花葉片翠綠,花色鮮艷,盛開時花團錦簇,美麗多姿,每簇花可開2個月之久,觀賞期長。由于繡球花的孕性花極為少數,所以不易結種,常用分株、壓條或扦插方法繁殖,但分株、壓條繁殖倍率低,速度慢,而扦插繁殖又會受到季節(jié)的限制,不能常年生產苗木,很難滿足市場的需求。技術實現要素:針對現有技術存在的不足,本發(fā)明的目的之一是提供一種繁殖周期短,效率高,成本低的繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法。本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術方案得以實現的:一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法,具體步驟如下:s1:外植體選擇;s2:外植體消毒;s3:誘導培養(yǎng);s4:增殖培養(yǎng);s5:生根培養(yǎng),其中。減血清培養(yǎng)基減少了實驗中的血清干擾。
3)培養(yǎng)方法:將配制的1/2cs生長培養(yǎng)基分裝于長、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,用移液槍吸取帶有無菌水的無菌種子,吹打在無菌濾紙上,用無菌尖頭鑷子將種子均勻點播在培養(yǎng)基上;于溫度22-24℃、濕度50-70%、光照強度1500-2000lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:哥倫比亞型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)16d的幼苗,表現為植株健壯,蓮座葉均已伸展,葉色濃綠,根系發(fā)達、平均主根長為。如圖1所示。對比培養(yǎng)例1:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例1,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:哥倫比亞型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)16d的幼苗,表現為植株健壯,蓮座葉部分伸展,葉色濃綠,根系發(fā)達、平均主根長為。如圖1所示。培養(yǎng)實例1和對比培養(yǎng)例1的培養(yǎng)結果比較:哥倫比亞型擬南芥在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%;在相同條件下培養(yǎng)16d時,與1/2ms生長培養(yǎng)基相比,1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳,主要表現為蓮座葉長勢更好、根系更為發(fā)達。如圖1所示。F12培養(yǎng)基提供了豐富的營養(yǎng)支持。河南DMEM/F12培養(yǎng)基答疑解惑
減血清培養(yǎng)基減少了實驗中血清帶來的變異性。廣東RPMI1640培養(yǎng)基包括
1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:中雙11號油菜種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)9d的幼苗,表現為植株健壯、平均株高為,葉色濃綠,莖稈粗壯、平均莖中粗為,根系發(fā)達、平均根數為(>)、平均主根長為。如圖3所示。培養(yǎng)實例3和對比培養(yǎng)例3的培養(yǎng)結果比較:中雙11號油菜種子在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%;在相同條件下培養(yǎng)9d時,與1/2ms生長培養(yǎng)基相比,1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳,其株高、根的數目優(yōu)于1/2ms生長培養(yǎng)基,莖粗及平均主根長度與1/2ms生長培養(yǎng)基相近。如圖3所示。培養(yǎng)實例4:馬鈴薯無菌苗培養(yǎng)生長培養(yǎng)基配制:1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l,用超純水溶解,。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。培養(yǎng)方法:以克新18號馬鈴薯為例,將配制好的1/2cs生長培養(yǎng)基分裝于長、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,選擇生長旺盛的馬鈴薯脫毒苗,于無菌環(huán)境下,根據實際需要,用手術剪刀剪取約1cm長的至少帶有1個葉芽的莖端或莖段,用彎頭鑷子將其1/3-1/2長度垂直插入培養(yǎng)基中;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時間14h、黑暗時間10h)條件下培養(yǎng)。廣東RPMI1640培養(yǎng)基包括