牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)與細菌DNA拓撲異構(gòu)酶的主要區(qū)別如下:1.**來源不同**:-牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I來源于牛痘病毒,是一種真核生物病毒中的酶。-細菌DNA拓撲異構(gòu)酶則來源于原核生物,如大腸桿菌的ω蛋白等。2.**功能特性**:-牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I能夠解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),并且識別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復(fù)合物,遇到DNA的5’-OH基團后,重新連接形成完整DNA鏈。-細菌DNA拓撲異構(gòu)酶,如大腸桿菌的ω蛋白,主要功能是催化DNA鏈斷開和結(jié)合的偶聯(lián)反應(yīng),以改變DNA的拓撲結(jié)構(gòu)。3.**活性條件**:-牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性。-細菌DNA拓撲異構(gòu)酶可能需要Mg2+等金屬離子作為輔因子來發(fā)揮活性。4.**作用的DNA鏈**:-牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I能使正負兩方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由來的DNA拓撲異構(gòu)酶I只作用負鏈的超螺旋分子。5.**共價鍵形成**:-牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I與DNA形成共價連接,此酯鍵中所貯存的能量可能在切斷端的再結(jié)合上起著作用。-細菌DNA拓撲異構(gòu)酶在原核生物中是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成共價鍵。
通過SDS-PAGE、Western blot、質(zhì)譜等方法驗證蛋白的純度和分子量。通過活性測試評估蛋白的生物活性。Recombinant Human Follistatin
在分子生物學(xué)研究中,核酸染料是檢測DNA和RNA的重要工具。然而,傳統(tǒng)的溴化乙錠(EB)染料因其劇毒性和致病,逐漸被更安全的替代品所取代。GoldenView 吖啶橙核酸染料作為一種新型的核酸染料,憑借其性能和安全性,成為科研工作者的理想選擇。GoldenView 吖啶橙核酸染料的成分是吖啶橙,這是一種細胞滲透性熒光染料,能夠與核酸結(jié)合并發(fā)出熒光信號。其獨特的熒光特性使其在檢測雙鏈DNA(dsDNA)時呈現(xiàn)綠色熒光(530 nm),而在與單鏈DNA(ssDNA)或RNA結(jié)合時則發(fā)出紅色熒光(640 nm)。這種雙重熒光特性不僅提高了檢測的靈敏度,還為研究人員提供了更豐富的信息。在瓊脂糖凝膠電泳中,GoldenView 吖啶橙核酸染料表現(xiàn)出與EB相當?shù)撵`敏度,能夠清晰地檢測到大片段(>1 kb)的DNA。此外,該染料的使用方法與EB完全相同,無需改變現(xiàn)有的實驗流程,即可輕松替換傳統(tǒng)染料。安全性是GoldenView 吖啶橙核酸染料的另一大優(yōu)勢。與EB不同,GoldenView 經(jīng)過多項致突變性試驗驗證,結(jié)果均為陰性,表明其對細胞和環(huán)境更為安全。這種低毒性特性使其在實驗室中使用更為便捷,同時降低了對研究人員健康的潛在風險。Recombinant Human Proinsulin C-Peptide AnaloguePfu DNA Polymerase的熱穩(wěn)定性和保真性使其在優(yōu)化PCR條件時更為靈活,比如在GC含量較高的模板中。
一、產(chǎn)品特點高純度與穩(wěn)定性dNTPSetSolution中的每種核苷酸(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)濃度均為100mM,純度超過99%,經(jīng)HPLC驗證,無DNase和RNase污染。這種高純度的dNTP溶液能夠有效減少實驗中的非特異性擴增,確保實驗結(jié)果的準確性和重復(fù)性。獨立包裝與靈活使用該套裝將四種dNTP分別獨立包裝,便于用戶根據(jù)實驗需求精確調(diào)整每種dNTP的濃度,從而優(yōu)化反應(yīng)條件。這種靈活性對于復(fù)雜的分子生物學(xué)實驗尤為重要,例如多重PCR和高保真PCR。適用性dNTPSetSolution適用于多種分子生物學(xué)應(yīng)用,包括但不限于PCR、實時熒光定量PCR、RT-PCR、cDNA合成和DNA標記。其超純的成分和穩(wěn)定的性能使其能夠兼容各種DNA聚合酶,包括高保真酶和熱啟動酶。二、性能優(yōu)勢高效擴增在PCR反應(yīng)中,dNTP的純度和濃度直接影響擴增效率。dNTPSetSolution能夠支持長達20kb的DNA片段擴增,表現(xiàn)出色的擴增能力和穩(wěn)定性。此外,其高純度特性可以減少非特異性產(chǎn)物的生成,提高實驗的特異性和靈敏度。
T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因編輯中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在突變體檢測和基因編輯效率評估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具體應(yīng)用步驟和特點:1.**基因編輯效率評估**:-T7EI用于評估CRISPR-Cas9在給定的導(dǎo)向RNA靶位點上對細胞群體進行基因編輯的效率。-通過PCR擴增圍繞CRISPR導(dǎo)向RNA靶位點的基因組DNA,如果CRISPR-Cas9介導(dǎo)的非同源末端連接(NHEJ)修復(fù)事件引入了突變,變性和退火將形成突變型和野生型PCR擴增子的異源雙鏈DNA。2.**突變體檢測**:-如果CRISPR/Cas9編輯成功在DNA上引入突變,則可與野生型DNA片段退火產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。T7EI可以識別該DNA上的不完全配對的DNA位點然后進行雙鏈切割,通過瓊脂糖凝膠電泳即可顯示酶切后的條帶,從而半定量判定基因編輯效果。-T7EI能識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯配DNA,不能識別1bp的插入、缺失或突變。3.**實驗步驟**:-收集細胞并提取基因組DNA,然后使用PCR擴增期望編輯的基因組區(qū)域。擴增子的長度建議為0.5-1kb。-對擴增的DNA進行變性和退火復(fù)性,以產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。-使用T7EI酶處理退火后的DNA產(chǎn)物,在37℃孵育15分鐘。
T7EndonucleaseI(T7EI)是一種特殊的DNA內(nèi)切酶,具有以下特點:1.**識別錯配DNA**:T7EI能夠識別并切割不完全配對的DNA、十字型結(jié)構(gòu)DNA、Holliday結(jié)構(gòu)或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點**:T7EI切割錯配位點5'端的、第二或第三個磷酸二酯鍵。3.**靈敏度**:T7EI對錯配DNA的識別非常靈敏,能夠檢測并切割單堿基和多堿基的錯配。4.**應(yīng)用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)導(dǎo)致的基因突變的鑒定。它通過識別錯配DNA來幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標效應(yīng)。5.**直接電泳檢測**:T7EI的產(chǎn)物可以直接通過電泳進行檢測,這使得它在實驗操作中更為方便。6.**來源**:T7EI來源于大腸桿菌菌株,是一種麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)和T7核酸內(nèi)切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:盡管T7EI在商業(yè)上使用時成本較高,但它在大規(guī)模樣本測試中,尤其是在基因突變鑒定方面,提供了一種有效的篩選方法。8.**特殊注意事項**:T7EI能夠識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯配DNA,但不能識別1bp的插入、缺失或突變。這些特點使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)的應(yīng)用中。Ultra-Long DNA Polymerase是一種專為擴增超長DNA片段設(shè)計的聚合酶能夠擴增長達數(shù)十kb上百kb的DNA片段。Recombinant Mouse PLD4 Protein,His Tag
Phusion Master Mix的成分為Phusion DNA聚合酶,這是一種通過融合技術(shù)開發(fā)的高保真酶,具有極低的錯誤率。Recombinant Human Follistatin
高靈敏度與特異性該試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系和新一代TaqDNA聚合酶,結(jié)合高效的逆轉(zhuǎn)錄酶,能夠在低濃度RNA樣本中實現(xiàn)高靈敏度的檢測。其特異性高,即使在復(fù)雜的樣本中,也能通過熔解曲線分析呈現(xiàn)單一峰,避免非特異性擴增。防污染設(shè)計OneStepRT-qPCRSYBRGreenKit(UDGPlus)內(nèi)置dUTP/UDG防污染系統(tǒng),能夠有效降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,防止實驗室氣溶膠污染對實驗結(jié)果的干擾。這一特性在病毒檢測和低豐度基因表達分析中尤為重要。操作簡便該試劑盒將逆轉(zhuǎn)錄和qPCR反應(yīng)整合在同一管中完成,避免了多次開蓋操作,減少了人為誤差和污染風險。同時,預(yù)混液的設(shè)計使得實驗操作更加便捷,用戶只需加入引物和模板即可進行反應(yīng)。示蹤染料輔助試劑盒中的反應(yīng)緩沖液含有惰性示蹤染料,通過顏色變化(如藍色與黃色混合后變?yōu)榫G色)直觀判斷樣本是否加入,提高了實驗操作的準確性和可靠性。兼容性該試劑盒適用于多種qPCR儀器,并提供不同濃度的ROX校正染料,以滿足不同儀器的需求。Recombinant Human Follistatin