制備血小板裂解液保存溫度

細胞zhiliao的生產(chǎn)是一項費時又昂貴的工程。優(yōu)化生產(chǎn)工藝通常會涉及優(yōu)化培養(yǎng)參數(shù)去減少時間、降低成本，同時提供呈現(xiàn)預(yù)期療效的表型。細胞增長所需的培養(yǎng)基補充劑也是整個細胞生產(chǎn)工藝中的一個較關(guān)鍵的因素。胎牛血清（FBS）一直以來被作為是細胞培養(yǎng)的常用補充劑，但因涉及倫理和安全問題，如今從加工過的血液中提取的人源培養(yǎng)基補充劑已經(jīng)得到越來越多的使用。血小板因其在血栓形成中的作用而聞名，很近，血小板被認為是傷口部位再生過程的關(guān)鍵介質(zhì)。血小板裂解過程中釋放的生長因子和細胞因子可調(diào)節(jié)局部免疫應(yīng)答，并啟動局部組織的加速恢復(fù)(圖1)?？紤]到血小板在人類生物學(xué)中這些作用，也就不難理解為什么處理過的血小板裂解液能夠給細胞培養(yǎng)基提供可靠的促生長特性了。血小板裂解液是由富含血小板的血漿純化萃取而成,其中包含很多不同的細胞生長因子。制備血小板裂解液保存溫度

本研究中使用的HPL是Stemulate公司兩款人源血小板裂解液（NH和H)是在工業(yè)規(guī)模(很小批量為20L)生產(chǎn)的，具備高度的批間一致性。將脂肪來源的間充質(zhì)干細胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS進行傳代培養(yǎng)11代。在DME/F-12中分別添加5、7.5或10%Stemulate-NH，并與10%胎牛血清進行比較。羊膜來源間充質(zhì)干細胞也在2.5或5%Stemulate中培養(yǎng)，與10%胎牛血清相比。牙髓來源的骨髓間充質(zhì)干細胞在DME/F-12中添加不同濃度的Stemulate-NH或Stemulate-H，并與添加10%FBS的培養(yǎng)基進行比較。在所有實驗中，每天都監(jiān)測細胞，每次傳代結(jié)束時，收獲細胞，并使用臺盼藍和一個自動細胞計數(shù)器計數(shù)然后繼續(xù)傳代。無需添加肝素血小板裂解液市場報價GMP級人血小板裂解液, 富含各類生長因子, 是很好的胎牛血清替代物。

本發(fā)明涉及細胞生物學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種血小板裂解液的制備方法及其應(yīng)用，用于替代動物來源的血清，為間充質(zhì)干細胞擴增和生產(chǎn)提供的營養(yǎng)。該制備方法包括：將血小板在20～24℃振蕩保存1～5d,采用反復(fù)凍融法和超聲法進行處理,離心,收集上清液,去除纖維蛋白,獲得血小板裂解液.本發(fā)明提供的血小板裂解液的制備方法可明顯提高血小板裂解液中細胞因子含量,且可進行細胞因子的定量平衡,有利于減少產(chǎn)品批間的差異,可達到穩(wěn)定的促進人源性細胞生長的作用。

在已有的上百篇文獻中，報道了Sexton公司的Stemulate和nliven已經(jīng)被確定為間充質(zhì)干細胞MSC的良好生長補充劑，并且支持各種組織來源包括脂肪、骨髓、軟骨、牙髓和臍帶中的MSCs的擴增培養(yǎng)。Sexton公司標準型和PR處理的血小板裂解液始終優(yōu)于輻照胎牛血清，幫助用戶優(yōu)化MSCs的生產(chǎn)，用戶通過使用Sexton公司的血小板裂解液培養(yǎng)基生長劑，降低時間和花費的成本，可帶來更快的倍增時間。既可以減少潔凈室生產(chǎn)時間，也可以減少試劑的使用量，實現(xiàn)總成本的降低。人源血小板裂解液適合應(yīng)用在多種來源的間充質(zhì)原代干細胞培養(yǎng)過程。

PLBioScience成立于2015年，是德國亞琛工業(yè)大學(xué)的一個分支機構(gòu)。2013年，他們的首席執(zhí)行官Dr.HatimHemeda從事干細胞研究：他用自己的血小板濃縮液取得了很好的結(jié)果。由于當時沒有商用，他開發(fā)了一種受保護的技術(shù)，用于大規(guī)模生產(chǎn)人血小板裂解液，致力于為用戶提供安全和無動物成分的細胞培養(yǎng)補充劑的解決辦法。PLBioScience質(zhì)量申明：PLBioScience重視客戶需求，努力為他們提供滿足甚至超越他們期望的產(chǎn)品和服務(wù)。公司的hPL來源于輸血級的血小板，在無菌條件下通過大量混合的血小板單位進行生產(chǎn)，批次和批次間的穩(wěn)定性保證了客戶可重復(fù)的實驗證據(jù)。血源的持續(xù)供應(yīng)確?？蛻魧τ趆PL獲得穩(wěn)定的供貨及價格。所有產(chǎn)品都經(jīng)過充分過濾，測試和認證。血小板裂解液的添加比例是多少？品相佳血小板裂解液價格

血小板裂解液如何復(fù)蘇？制備血小板裂解液保存溫度

目的制備高含量細胞因子的血小板裂解液(PL).方法采用反復(fù)凍融法[-80℃~37℃凍融3次(凍24h/次)]和超聲法(285W,每次超聲處理5s停止5s,共10次)處理10份單**小板制劑(30mL/份),ELISA法對細胞因子,血小板衍生長因子(PDGF)-AA,PDGF-AB,PDGF-BB,轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1),血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)檢測,同時將2種方法制備的PL按10%比例加入常規(guī)培養(yǎng)基DMEM/F12培養(yǎng)第5代人臍血間充質(zhì)干細胞,觀察傳至第7代細胞增殖情況,并與FBS液培養(yǎng)(組)比較.結(jié)果血小板保存3d后制備成的PL各因子含量均升高。制備血小板裂解液保存溫度

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