接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關于Polysciences PEI轉染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!有誰用過Polysciences的PEI轉染試劑?可支持IND申報PEI轉染試劑試用裝低成本的選擇
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio?????。如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!?云南PEI轉染試劑試用裝提供了一個低成本的初體驗選擇PEI轉染試劑對復合物孵化的時間是有要求的,一般建議5~20分鐘之間.
美國Polysciences成立于1961年,是一家歷史久遠的化學品制造公司,產品guang fan應用于各個科研領域。Polysciences在聚乙烯亞胺轉染試劑(PEI轉染試劑)的制造工藝上具有長達20多年的經驗,其經典的PEI轉染試劑產品系列包括研究級產品PEI 25K,PEI MAX和Transporter 5,以及cGMP級MAXgene GMP,被guang fan用于抗體藥物和重組蛋白,臨床等級慢病毒和AAV病毒的大規(guī)模生產,為全球客戶提供成本效益高、供應穩(wěn)定和質量可靠的選擇。在過去10年間,Polysciences的PEI轉染試劑已被用于國內外多項臨床申報。如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!
產品簡介:Transporter 5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶液,由PEI MAX配置而成,采用0.1um PES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險。Transporter 5將DNA縮聚成帶正電荷的復合物,這些復合物很容易通過內吞作用進入細胞,并且Transporter 5-DNA 復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉染效率。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgene GMP用于商業(yè)化生產。Transporter 5轉染試劑能高效地將DNA轉染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲(SF9、SF21) 等真核細胞系,可作用于大到135,000個核苷酸的質粒,所以較大的質粒也可以成功地轉染。 Transporter 5可節(jié)省試劑準備時間,加快項目進度。經過嚴格的性能檢測,確保品質,在新藥研發(fā)過程中是一款快速、重復性好、可用于批量產的轉染試劑。產品特點:非GMP,研究級PEI轉染試劑溶液;高轉染效率;無縫過渡到MAXgene GMP;易放大,可預測產量;用于工藝開發(fā),臨床前和早期臨床研究。如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!PEI轉染試劑有沒有毒性?
線性化聚乙烯亞胺pei25,000,一種高電荷陽離子聚合物,非常容易結合于高電荷陰離子基質。工業(yè)應用上線性化pei可改善負電荷染料的物理外觀以調整染料的化學特性和增強染料與固相基質的黏附能力,常用作黏附增強劑,作用同多聚賴氨酸(poly-lysine);科研應用上;線性化pei能與dna或其他負電荷生物大分子簡單結合,正是這一特性,使得成為一種非常行之有效的載體運輸介質(vectorcarrier),即轉染試劑。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內客戶群體,生命科學領域一站式供應鏈體系,以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢.更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物。??如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!PEI試用裝在哪里可以申請?上手簡單的PEI轉染試劑試用裝無批次差異
用PEI轉染試劑時,一般和DNA的比例是多少呢?可支持IND申報PEI轉染試劑試用裝低成本的選擇
注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!?如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!?可支持IND申報PEI轉染試劑試用裝低成本的選擇