實時熒光定量PCR法常用的方法有兩種:第一種是SYBRGreen熒光染色定量PCR法;第二種是TaqMan熒光探針定量PCR法。這兩種方法各有優(yōu)缺點,在實驗中要根據(jù)實驗需求來選擇用那種方法。而對于宿主細胞殘留DNA檢測來講,TaqMan熒光探針定量PCR法比SYBRGreen熒光染色定量PCR法靈敏度更高,穩(wěn)定性更好,所以在生物制藥領(lǐng)域領(lǐng)域更多的客戶會選擇用TaqMan熒光探針定量PCR法來檢測樣本中的宿主細胞殘留DNA的量。定量PCR法用于宿主細胞殘留DNA檢測的原理是:定量PCR法也稱實時熒光定量PCR法(qPCR法)是在普通PCR的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的,在PCR反應(yīng)體系中加入可實時反映特異性擴增產(chǎn)物量變化的熒光基團,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。由于在PCR擴增的指數(shù)時期,模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系,因此稱為熒光定量PCR,也稱為real-timePCR。病毒性疫苗生物制品中宿主細胞殘留DNA檢測的必要性。上海質(zhì)粒殘留DNA檢測特點
南京正揚生物科技有限公司的HEK293細胞殘留DNA檢測試劑盒,基于TaqMan熒光探針法qPCR原理,可用于各種生物制品及藥品中間品、半成品和成品中來自于HEK293細胞的宿主細胞殘留DNA檢測,比較低檢測限可達到fg級別。具有檢測快速、特異性強、檢測靈敏度高、可防止氣溶膠污染、重復性好、回收率穩(wěn)定等優(yōu)點。本公司試劑盒質(zhì)控嚴格,可給終端客戶提供完整的性能驗證報告,以供客戶進行各種項目申報。且本公司提供售前售后服務(wù),幫助客戶解決實驗中遇到的問題,全程助力客戶順利完成實驗。南京E1A殘留DNA檢測試劑盒大腸桿菌宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒可檢測生物制品中大腸桿菌的殘留DNA。
在做宿主細胞殘留DNA檢測的時候肯能會出現(xiàn)BLK或是NCS(陰性對照)異常起跳的現(xiàn)象,但是我們通過查看多組分圖發(fā)現(xiàn)BLK或NCS(陰性對照)并沒有起跳,那么這種情況是什么原因?qū)е碌哪??首先我們通過多組分圖已經(jīng)確認BLK和NCS是沒有起跳的,這就說明實驗環(huán)節(jié)是沒有出現(xiàn)問題的,問題出在數(shù)據(jù)分析環(huán)節(jié),此時可以通過查看擴增曲線確認在擴增前期熒光信號有無過大的波動,前期有過大的信號波動會導致自動基線計算出現(xiàn)錯誤,所以會導致BLK和NCS出現(xiàn)異常起跳現(xiàn)象。我們只需要手動調(diào)整基線避開熒光信號波動再進行數(shù)據(jù)分析就可以了。
南京正揚生物科技有限公司的E.coli殘留DNA檢測試劑盒,基于TaqMan熒光探針法qPCR原理,可用于各種生物制品及藥品中間品、半成品和成品中來自于E.coli的宿主細胞殘留DNA檢測,比較低檢測限可達到fg級別。具有檢測快速、特異性強、檢測靈敏度高、可防止氣溶膠污染、重復性好、回收率穩(wěn)定等優(yōu)點。本公司試劑盒質(zhì)控嚴格,可給終端客戶提供完整的性能驗證報告,以供客戶進行各種項目申報。且本公司提供售前售后服務(wù),幫助客戶解決實驗中遇到的問題,全程助力客戶順利完成實驗。Vero宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒可檢測生物制品中Vero細胞的殘留DNA。
南京正揚生物科技有限公司的宿主細胞殘留DNA檢測試劑中的提取試劑盒可處理各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的宿主細胞DNA。組分簡單無需額外配置用于提取實驗的試劑;消化時間短整個實驗流程耗時少;由于操作步驟簡單便捷且無需額外配置實驗試劑,所以在提取中受實驗操作的影響較小。南京正揚生物科技有限公司的宿主細胞殘留DNA提取試劑盒采用的磁珠法提取樣本中的DNA,可處理多種復雜樣本可提取樣本中微量的DNA;提取效率更加穩(wěn)定,提取的均一性好,可重復性高。宿主細胞殘留DNA是影響生物制品安全性的關(guān)鍵因素之一,各國都對宿主細胞殘留DNA檢測做出了具體要求。鄭州CHO細胞殘留DNA檢測優(yōu)缺點
生物藥物工藝相關(guān)雜質(zhì)檢測之一:宿主細胞殘留DNA檢測。上海質(zhì)粒殘留DNA檢測特點
宿主細胞殘留DNA檢測實驗中BLK無模板對照結(jié)果異常出現(xiàn)的原因及解決辦法?BLK無模板對照的作用是用來評定本次實驗加樣環(huán)節(jié)是否發(fā)生了污染;如果BLK無模板發(fā)生起跳即有Ct值,就說明在本次實驗的加樣環(huán)節(jié)中發(fā)生了污染。一般的解決方式為用核酸清除劑噴灑擦拭qPCR樣品加樣區(qū)和加樣時用到的實驗儀器***污染,然后在qPCR加樣區(qū)直接用超純水或者DNA稀釋液作為樣本直接加樣上機檢測,根據(jù)結(jié)果判斷污染是否排除。在做宿主細胞殘留DNA檢測實驗的時候加標對照組是必須要做的一個對照組,其對數(shù)據(jù)分析起著至關(guān)重要的作用,但是我們要怎么確定加標量的多少呢?首先對于樣品加標來講加標量的設(shè)置要根據(jù)樣品中宿主細胞殘留DNA的濃度來確定,一般加標的量是樣品中宿主細胞殘留DNA量的5-1O倍,使加標樣品與樣品的Ct值>1,要避免因PCR波動性導致回收率不合格的情況。其次對于空白加標來講,只需要保持與樣品加標的加標量保持一直就可以了。上海質(zhì)粒殘留DNA檢測特點