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來源: 發(fā)布時間:2022-06-28

該模型能夠幫助我們研究pirb基因在免疫系統(tǒng)和神經系統(tǒng)的功能以及下游的調節(jié)機制。本發(fā)明的另一目的在于提供上述小鼠動物模型的構建方法。本發(fā)明所采用的第一種技術方案是:pirb基因敲入的小鼠動物模型,包括確定pirb基因的待敲入的特異性靶位點grna1和grna2,將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內含子1內,所述grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如。本發(fā)明所采用的第二種技術方案為:pirb基因敲入的小鼠動物模型的構建方法,具體按照以下步驟實施:步驟1、基于crispr/cas9技術構建針對c57bl/6j小鼠rosa26基因的特異性grna1和grna2,grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如;步驟2、構建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶載體,將打靶載體進行線性化處理;步驟3、步驟2中將含有l(wèi)oxp位點打靶載體、步驟1中有活性的grna1和grna2與cas9蛋白共同注射進入**小鼠受精卵中,獲得f0代小鼠;步驟4、將步驟3中性成熟的陽性f0小鼠分別與野生型鼠交配繁一代,獲得f1代雜合子小鼠,通過pcr、測序和southern雜交確定動物基因型;步驟5、將步驟4獲得的f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子小鼠。大鼠疾病建模請找上海東寰。哪家公司提供疾病動物模型建模公司

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實驗動物年齡:成年5、實驗動物體重:160-200g6、實驗動物環(huán)境:SPF級1、實驗方法:熱力致皮膚損傷法。麻醉大鼠,根據體重腹部備皮,然后固定于實驗臺上。將大鼠移近加熱純凈水的燒杯,將紗布條浸入熱水中,待水溫恒定于99℃時,取出紗布,立即平鋪于待燙部位,于紗布接觸大鼠皮膚后開始計時。致傷3s為淺II°燙傷,致傷10s為深II°燙傷。2、檢測標準:a.皮膚大體觀察:致傷3s大鼠局部皮膚發(fā)紅、輕微水腫。愈合后毛發(fā)生長良好,有少量紅褐**素沉著,皮膚輕微攣縮,表皮光滑;致傷10s大鼠局部皮膚發(fā)白、水腫。愈合后毛發(fā)生長良好,皮膚瘢痕形成,表面粗糙不平。b.皮膚組織病理學觀察:致傷3s大鼠表皮層次尚清楚,細胞明顯腫脹、變性,層次結構尚清楚,細胞核結構不清;致傷10s大鼠表皮細胞部分脫落,結構不清,明顯變性、壞死,部分細胞已溶解松江區(qū)疾病動物模型建模購買臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復制出來。

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pirb在軸突生長錐表達,位于富含肌動蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中,在神經元突起的表達呈點狀分布。文獻表明,pirb表達隨年齡增加,特別是在老齡認知損傷的小鼠海馬中,pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對海馬長時程增強的破壞作用需要pirb的參與,在ad轉基因模型中,pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失,而且介導幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們,pirb參與突觸可塑性,抑制pirb可能對ad起到***效應。但是在cns,pirb的功能和下游抑制性信號通路仍然未被闡明,因此迫切需要pirb的細胞和動物模型。目前對于pirb基因功能的研究,多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide,pep)和抑制劑,或者采用慢病毒轉染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響,后者慢病毒轉染在原代細胞和在體的轉染效率比較低,使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題,我們通過crispr/cas9技術建立了pirb基因敲入小鼠,將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點,為研究pirb在免疫系統(tǒng)或者神經系統(tǒng)的作用和機制提供了很好的工具。技術實現(xiàn)要素:本發(fā)明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動物模型。

腰椎間盤突出是造成全球大部分地區(qū)工作缺失和活動受限的主要疾病,隨著日常生活節(jié)奏的不斷加快,腰椎間盤突出癥已經成為臨床脊柱外科的常見病和多發(fā)病,而且發(fā)病人群越來越呈現(xiàn)年輕化及普遍化的趨勢。該病主要是由于腰椎長期的受力不均或突然性外傷,導致腰椎纖維環(huán)出現(xiàn)變形、破裂,纖維環(huán)、髓核及軟骨終板單獨或同時外突,從而壓迫到坐骨神經、神經根或馬尾神經,患者出現(xiàn)腰部疼痛,牽連股部,下肢足部放射性疼痛,引起神經功能、運動功能障礙,特定身體部位出現(xiàn)麻痹或癱瘓癥狀。良好的腰椎間盤突出動物模型的建立,可以生動直觀的幫助醫(yī)療工作者理解腰椎間盤突出壓迫神經后,神經的病理生理變化以及疾病的發(fā)***展規(guī)律,并可以通過成熟的動物模型,探索有效的***方法。近年來,隨著對腰椎間盤突出癥的認識研究的不斷深化,人們希望通過建立一種可靠、有效的腰椎間盤突出的動物模型,通過施加干預因素,更加準確地觀察模型體內產生的變化,探究人體內疾病發(fā)生機理,并將研究成果推廣到臨床,為***腰椎間盤突出癥提供合理、有效的防治手段。因此。這類動物疾病模型是指各種疾病共同性的一些病理變化過程的模型。

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即為本發(fā)明構建的一種pirb基因敲入的小鼠動物模型。本發(fā)明所采用第二種技術方案的特點還在于,步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結構。步驟3中grna1、grna2的濃度均為2~10pmol/ul,cas9蛋白的注射濃度為30~100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構建方法,本發(fā)明的小鼠動物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗證提供了良好的基礎。分離自pirb基因敲入小鼠的細胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調節(jié)作用的下游機制。動物模型作為人類疾病的縮影。無錫小鼠疾病動物模型建模

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目前鑒定出15個外顯子,外顯子1起始密碼為atg,外顯子15的終止密碼子是tga(轉錄本:)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白,包含由六個免疫球蛋白樣結構域(domain,d)組成(d1-d6)的胞外段,一個疏水的跨膜段,三個免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs,itims)和一個itims樣序列組成的胞內段。理論上講,pirb的分子量約為92kd,但是western-blot分析中,pirb經常位于105kd處,因為pirb是糖蛋白。以往研究發(fā)現(xiàn),pirb在免疫系統(tǒng)和中樞調節(jié)中均發(fā)揮重要作用。在免疫系統(tǒng)中,pirb在許多造血細胞都有表達,包括b細胞、肥大細胞、巨噬細胞、粒細胞和樹突細胞,但是在胸腺細胞、成熟的t細胞和自然殺傷細胞不表達。哪家公司提供疾病動物模型建模公司

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