上海地區(qū)生工生物 高通量測(cè)序服務(wù)

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中，制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液至關(guān)重要。而懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細(xì)胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運(yùn)作的呢？單細(xì)胞懸液質(zhì)控要求：?細(xì)胞濃度：700-1200cells/μl；?細(xì)胞活率>80%（當(dāng)細(xì)胞懸液活率低于70%時(shí)建議進(jìn)行去除死細(xì)胞處理）；細(xì)胞團(tuán)及碎片雜質(zhì)<5%（無(wú)細(xì)胞粘連，無(wú)明顯的細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)，并保證細(xì)胞的完整性）；?細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞直徑在7-40um之間（細(xì)胞直徑過(guò)大則建議進(jìn)行抽核處理）；?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。關(guān)鍵是KBSeq還可以省錢(qián)。上海地區(qū)生工生物 高通量測(cè)序服務(wù)

AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一種小分子染料，可以通過(guò)完整的細(xì)胞膜，嵌入所有細(xì)胞（活細(xì)胞和死細(xì)胞）的細(xì)胞核，呈現(xiàn)綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過(guò)不完整的細(xì)胞膜，即死細(xì)胞的細(xì)胞膜，嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核，呈現(xiàn)紅色熒光，通過(guò)標(biāo)記出的綠色熒光和紅色熒光就可以辨別出活細(xì)胞和死細(xì)胞，這種特異性染色的方法也可以排除無(wú)核細(xì)胞、雜質(zhì)、碎片等的干擾。熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)結(jié)果可以讓我們直觀的看到：細(xì)胞濃度（總細(xì)胞，活細(xì)胞，死細(xì)胞）、細(xì)胞存活率（臺(tái)盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色）、細(xì)胞平均直徑、細(xì)胞聚團(tuán)率、細(xì)胞直徑分布等結(jié)果的展示。上海地區(qū)多重PCR高通量測(cè)序如果是水體樣品，建議采用濾膜過(guò)濾后，將濾膜寄送來(lái)生工。

對(duì)于細(xì)胞樣品，送樣量需達(dá)到 5 × 106（5乘10的6次方）數(shù)量級(jí)。富集后置于 2 ml Ep管中，用 1 ml TRIzol 重懸，注意取樣后立即用液氮或干冰乙醇速凍，保存于-80°C 冰箱，埋于足量的干冰中用保溫箱寄送。強(qiáng)烈建議細(xì)胞樣品先做細(xì)胞鑒定及支原體/衣原體污染之后，再送出來(lái)。對(duì)于血液樣本，只接收未凍存過(guò)的抗凝血新鮮樣本?？鼓齽┎豢墒褂酶嗡剽c，可用EDTA或ACD抗凝劑，取血后以冰袋保存，切記不能使血液凍結(jié)，從取血之時(shí)開(kāi)始計(jì)算，須在48小時(shí)之內(nèi)送達(dá)生工上海總部高通量測(cè)序部。如果不能提供新鮮樣本，則請(qǐng)?zhí)峁难褐刑崛〉目俁NA樣本。備樣要求詳見(jiàn)B、RNA 樣品。

通過(guò)顯微鏡使用血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢能觀察到懸液背景質(zhì)量和細(xì)胞數(shù)目及活性的評(píng)估。讓我們?cè)賮?lái)回顧一下臺(tái)盼藍(lán)染色原理：臺(tái)盼藍(lán)染色原理：臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。怎樣通過(guò)血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行質(zhì)檢操作呢？將血球計(jì)數(shù)板擦拭干凈，取干凈的蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上；將細(xì)胞懸液混勻（或10μl臺(tái)盼藍(lán)+10μl細(xì)胞懸液），吸出10μl懸液至計(jì)數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)使細(xì)胞核懸液鋪滿蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間；在顯微鏡下分別對(duì)V1/V2/V3/V4四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)；按細(xì)胞計(jì)數(shù)公式進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算公式：細(xì)胞總數(shù)={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*懸液體積*稀釋倍數(shù)，V1/V2/V3/V4為各個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)目，細(xì)胞活率=活細(xì)胞數(shù)目/總細(xì)胞數(shù)目*100%。生工高通量測(cè)序部擁有豐富的樣品處理經(jīng)驗(yàn)，日均處理樣品200余例。

單細(xì)胞懸液質(zhì)檢方法，在進(jìn)行單細(xì)胞懸液質(zhì)檢時(shí)，需要用到以下兩大質(zhì)檢利器的輔助：熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（主要使用臺(tái)盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色法）進(jìn)行質(zhì)檢。首先我們先要了解一下細(xì)胞質(zhì)檢時(shí)染料染色的原理：臺(tái)盼藍(lán)染色原理：臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)結(jié)果可以讓我們直觀的看到：細(xì)胞濃度（總細(xì)胞，活細(xì)胞，死細(xì)胞）、細(xì)胞存活率（臺(tái)盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色）、細(xì)胞平均直徑、細(xì)胞聚團(tuán)率、細(xì)胞直徑分布等結(jié)果的展示。目前，生工生物已開(kāi)展10x單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（scRNA-seq）服務(wù)，如果正好您有需要，那就快快來(lái)call我們吧！生工生物 高通量測(cè)序原理

準(zhǔn)確、迅速，可以說(shuō)是KBSeq的代名詞了。上海地區(qū)生工生物 高通量測(cè)序服務(wù)

生工高通量測(cè)序樣品要求，環(huán)境樣品：如果是新鮮土壤/污泥樣品，可以以冰袋運(yùn)輸，不超過(guò)3天;如果是凍存過(guò)的樣品（-20°C或者-80°C冰箱保存），為避免反復(fù)凍融，建議用足量的干冰（根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，在秋冬季節(jié)，如果打包合適，3公斤塊狀干冰可以維持30-40小時(shí)）寄送;如果是水體樣品，建議采用濾膜過(guò)濾后，將濾膜寄送來(lái)生工。生工不負(fù)責(zé)過(guò)濾。要求濾膜3張，冰袋運(yùn)輸，不超過(guò)3天。其余特殊環(huán)境樣品，具體咨詢生工高通量測(cè)序部。

DNA樣品：請(qǐng)?zhí)峁╇娪灸z圖，濃度>20 ng/μl，總量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或凍干DNA，可冰袋運(yùn)輸，不超過(guò)3天。 上海地區(qū)生工生物 高通量測(cè)序服務(wù)

生工生物工程（上海）股份有限公司致力于醫(yī)藥健康，是一家生產(chǎn)型的公司。公司業(yè)務(wù)分為生化試劑，實(shí)驗(yàn)耗材，實(shí)驗(yàn)試劑，研發(fā)等，目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn)，為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力，努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí)，遵守行業(yè)規(guī)范，植根于醫(yī)藥健康行業(yè)的發(fā)展。在社會(huì)各界的鼎力支持下，持續(xù)創(chuàng)新，不斷鑄造高質(zhì)量服務(wù)體驗(yàn)，為客戶成功提供堅(jiān)實(shí)有力的支持。