KBSeq全質(zhì)粒測序跟一代測序相比有什么優(yōu)點(diǎn)呢?一代測序:1.數(shù)據(jù)質(zhì)量,套峰,雙峰等情況,需要人工分析校對。2.測序長度,1 kb。3.成本,低。4.樣本用量,100 ng。5.精確度,70-90%。6.測序能力,需要測序引物,只能測測序引物間的片段序列。7.通量低,(與讀長有關(guān))。8.實(shí)驗(yàn)周期,如果片段長度超過5K,測通可能需要15天左右。對于測序長度較長,如果我們用Sanger測序往往需要花費(fèi)大量的時(shí)間,而我們KBSeq全質(zhì)粒測序則只需要5-7天,就可以測通片段長度小于30kb以下的片段。KBSeq全質(zhì)粒測序?qū)τ跇颖镜牧?,要求的也比較少,比如質(zhì)粒我們的樣本要求DNA的濃度需≥ 1 ng/μl, 體積需≥5 μl,如果比較珍貴的樣本或者是樣本比較難提取的,KBSeq就更為適合了。生工高通量測序部擁有豐富的樣品處理經(jīng)驗(yàn),日均處理樣品200余例。上海地區(qū)lncRNA高通量測序公司
2021年11月1日,在這個(gè)平凡而又特殊的日子里,生工生物高通量測序部迎來了一位新成員——10xGenomics Chromium X!不要看我們個(gè)頭小,我們可是百萬級單細(xì)胞捕獲神器吆。X是如何實(shí)現(xiàn)單次運(yùn)行有這么高的吞吐量呢?多通道+高捕獲+10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)。X儀器本身有16個(gè)通道(Controller為8通道),每個(gè)通道比較多捕獲20000個(gè)細(xì)胞(Controller為10000個(gè)細(xì)胞)。再結(jié)合10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù),每個(gè)通道比較多可捕獲60,000個(gè)細(xì)胞,去除雙細(xì)胞率后,每張芯片比較多可捕獲750,000個(gè)單細(xì)胞。宏全基因組高通量測序應(yīng)用截止目前為止,生工生物可是為數(shù)不多的同時(shí)擁有ChromiumController和ChromiumX平臺(tái)的公司。
RNA類高通量測序樣品要求:對于需要進(jìn)行 RNA 抽提的樣品,請使用新鮮取樣的實(shí)驗(yàn)材料,當(dāng)場分成小塊(動(dòng)物樣品厚度需小于0.5 cm,植物樣品厚度需小于0.3 cm)后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰(根據(jù)經(jīng)驗(yàn),在秋冬季節(jié),如果打包合適,5 公斤塊狀干冰可以維持 50 小時(shí),而小塊的干冰能更好的包裹樣品,但需比塊狀干冰多加些)中用保溫箱寄送。一般組織樣品,送樣量至少200 mg/樣;如果樣品屬于孢子,送樣量至少500 mg/樣。
懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細(xì)胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運(yùn)作的呢?單細(xì)胞懸液質(zhì)控要求:?細(xì)胞濃度:700-1200cells/μl;?細(xì)胞活率>80%(當(dāng)細(xì)胞懸液活率低于70%時(shí)建議進(jìn)行去除死細(xì)胞處理);細(xì)胞團(tuán)及碎片雜質(zhì)<5%(無細(xì)胞粘連,無明顯的細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán),并保證細(xì)胞的完整性);?細(xì)胞狀態(tài):細(xì)胞直徑在7-40um之間(細(xì)胞直徑過大則建議進(jìn)行抽核處理);?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。特別申明:不能采用過柱離心的方法提取總RNA。
RNA樣品:1.請務(wù)必提供每個(gè)樣品具體的濃度、體積、制備時(shí)間以及物種來源。比較好附上電泳膠圖或者 Agilent Bioanalyzer 儀器檢測數(shù)據(jù)等;2.對于普通轉(zhuǎn)錄組樣品,請?zhí)峁舛取?00 ng/μl、總量≥2 μg 的總 RNA 樣品,樣品請去蛋白并進(jìn)行 DNase處理;一般情況下,普通轉(zhuǎn)錄組測序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280為 2.0~2.2,Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測獲得的總RNA 28S:18S≥1,RIN≥8;對于全長轉(zhuǎn)錄組測序樣品(ISO-seq),請?zhí)峁舛却笥?00 ng/ul,總量大于5 μg的總RNA樣品。樣品請去蛋白并進(jìn)行 DNase 處理;全長轉(zhuǎn)錄組測序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280 為 2.0~2.2,2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測獲得的總RNA 28S:18S≥1,RIN≥8.5;RNA樣品請用1.5 mL離心管裝好并用封口膜封好,并安置于50 mL離心管內(nèi)或其他類似容器里,并旋緊蓋子。上海地區(qū)宏基因組高通量測序產(chǎn)品
組織材料樣品(提取RNA用)建議將標(biāo)簽用膠帶貼到管壁,干冰運(yùn)輸。上海地區(qū)lncRNA高通量測序公司
對于用RNA組織保存液寄送的樣品,請按照RNA組織保存液說明保存和寄送。請注意:1)樣品浸入組織保存液之前,對于動(dòng)物組織樣品,須以建議快速度將樣品剪切成厚度小于0.5cm的碎塊;對于植物樣品,須以建議快速度將樣品剪切成厚度小于0.3cm的碎塊。2)鼠肝、腎和脾等小organ樣品和沒有蠟質(zhì)保護(hù)層的植物樣品可不剪切直接放入保存液中保存,有蠟質(zhì)保護(hù)層的植物樣品需要先將蠟表皮破壞。3)確保將樣品完全浸泡在保存液中,不讓其粘貼在管壁和蓋上。上海地區(qū)lncRNA高通量測序公司
生工生物工程(上海)股份有限公司致力于醫(yī)藥健康,是一家生產(chǎn)型公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋生化試劑,實(shí)驗(yàn)耗材,實(shí)驗(yàn)試劑,研發(fā)等,價(jià)格合理,品質(zhì)有保證。公司從事醫(yī)藥健康多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計(jì)、強(qiáng)大的技術(shù),還有一批專業(yè)化的隊(duì)伍,確保為客戶提供良好的產(chǎn)品及服務(wù)。在社會(huì)各界的鼎力支持下,持續(xù)創(chuàng)新,不斷鑄造高質(zhì)量服務(wù)體驗(yàn),為客戶成功提供堅(jiān)實(shí)有力的支持。