無(wú)參轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序高通量

通過(guò)顯微鏡使用血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢得到質(zhì)檢結(jié)果：明場(chǎng)（細(xì)胞未染色）：主要可以觀察懸液背景質(zhì)量（背景干凈，無(wú)雜質(zhì)碎片，無(wú)細(xì)胞團(tuán)塊）；臺(tái)盼藍(lán)場(chǎng)（細(xì)胞與臺(tái)盼藍(lán)染色后）：主要可以觀察活性（主要為活細(xì)胞，未染色藍(lán)色的為活細(xì)胞）；通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)場(chǎng)計(jì)算活率：90%>80%；細(xì)胞濃度:710cells/μl;等結(jié)果來(lái)看，血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢結(jié)果的展示可以看出所有指標(biāo)均符合上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)，屬于高質(zhì)量單細(xì)胞懸液。以上就是我們本次的單細(xì)胞懸液質(zhì)檢指南分享啦。請(qǐng)注意選擇無(wú)RNA酶的容器盛放樣本，盡量避免RNA降解。無(wú)參轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序高通量

細(xì)胞質(zhì)檢時(shí)染料染色的原理：臺(tái)盼藍(lán)染色原理：臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一種小分子染料，可以通過(guò)完整的細(xì)胞膜，嵌入所有細(xì)胞（活細(xì)胞和死細(xì)胞）的細(xì)胞核，呈現(xiàn)綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過(guò)不完整的細(xì)胞膜，即死細(xì)胞的細(xì)胞膜，嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核，呈現(xiàn)紅色熒光，通過(guò)標(biāo)記出的綠色熒光和紅色熒光就可以辨別出活細(xì)胞和死細(xì)胞，這種特異性染色的方法也可以排除無(wú)核細(xì)胞、雜質(zhì)、碎片等的干擾。上海市單細(xì)胞測(cè)序高通量測(cè)序目前，生工生物已開展10x單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（scRNA-seq）服務(wù)，如果正好您有需要，那就快快來(lái)call我們吧！

2021年11月1日，在這個(gè)平凡而又特殊的日子里，生工生物高通量測(cè)序部迎來(lái)了一位新成員——10xGenomics Chromium X！不要看我們個(gè)頭小，我們可是百萬(wàn)級(jí)單細(xì)胞捕獲神器吆。X是如何實(shí)現(xiàn)單次運(yùn)行有這么高的吞吐量呢？多通道+高捕獲+10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)。X儀器本身有16個(gè)通道（Controller為8通道），每個(gè)通道比較多捕獲20000個(gè)細(xì)胞（Controller為10000個(gè)細(xì)胞）。再結(jié)合10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)，每個(gè)通道比較多可捕獲60,000個(gè)細(xì)胞，去除雙細(xì)胞率后，每張芯片比較多可捕獲750,000個(gè)單細(xì)胞。

真核/原核有參mRNA-Seq，項(xiàng)目介紹：轉(zhuǎn)錄組（transcriptome）廣義上指某一生理?xiàng)l件下，細(xì)胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的gather，狹義上指所有mRNA的gather。轉(zhuǎn)錄組是研究基因表達(dá)的主要手段，是連接基因組遺傳信息與生物功能的蛋白質(zhì)組的紐帶。轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是生物體重要的調(diào)控方式，通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控，是目前運(yùn)用較多的研究方式。測(cè)序使用Illumina Xten平臺(tái)，測(cè)序原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)質(zhì)控后，mapping至參考基因組序列，對(duì)mapping到基因上的reads進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算基因的表達(dá)量后，進(jìn)行基因表達(dá)差異及差異基因GO、KOG（原核生物為COG）、KEGG功能富集分析，KEGG pathway等分析。對(duì)于多個(gè)樣本，可進(jìn)行重復(fù)相關(guān)性檢查、共表達(dá)分析、PCA主成分分析。另外，依據(jù)參考基因組，可進(jìn)行諸如基因覆蓋度、測(cè)序飽和度等驗(yàn)證性分析；可變剪切分析、SNP/InDel分析、新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測(cè)以及聯(lián)合miRNA數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析等分析。另外，還可以進(jìn)行基因功能互作、蛋白網(wǎng)絡(luò)互作等分析，深入研究基因功能，進(jìn)一步揭示基因間互作網(wǎng)絡(luò)等信息，為研究網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)理提供方向。準(zhǔn)確、迅速，可以說(shuō)是KBSeq的代名詞了。

RNA樣品：1.請(qǐng)務(wù)必提供每個(gè)樣品具體的濃度、體積、制備時(shí)間以及物種來(lái)源。比較好附上電泳膠圖或者 Agilent Bioanalyzer 儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)等；2.對(duì)于普通轉(zhuǎn)錄組樣品，請(qǐng)?zhí)峁舛取?00 ng/μl、總量≥2 μg 的總 RNA 樣品，樣品請(qǐng)去蛋白并進(jìn)行 DNase處理；一般情況下，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280為 2.0~2.2，Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測(cè)獲得的總RNA 28S:18S≥1，RIN≥8；對(duì)于全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序樣品（ISO-seq）,請(qǐng)?zhí)峁舛却笥?00 ng/ul，總量大于5 μg的總RNA樣品。樣品請(qǐng)去蛋白并進(jìn)行 DNase 處理；全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280 為 2.0~2.2，2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測(cè)獲得的總RNA 28S:18S≥1，RIN≥8.5；DNA樣品建議用藍(lán)冰運(yùn)輸。上海ITS高通量測(cè)序原理

RNA樣品建議用足量干冰運(yùn)輸。無(wú)參轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序高通量

微生物基因組重測(cè)序（有參）：目前越來(lái)越多的微生物基因組被解析出來(lái)了。從而使得科研工作者們可以對(duì)某些物種微生物進(jìn)行進(jìn)行物種進(jìn)化、種群特征、選擇壓力等研究。利用高通量測(cè)序技術(shù)，對(duì)有參考基因組微生物進(jìn)行多個(gè)體的基因組重測(cè)序，精細(xì)分析其與參考基因組的SNP、InDel、SV等變異信息。微生物基因組從頭測(cè)序（無(wú)參）：對(duì)于不斷分離培養(yǎng)微生物的客戶來(lái)說(shuō)，要確定一個(gè)菌株是否是新菌株或者新菌種，較快捷的辦法就是，直接進(jìn)行基因組測(cè)序。利用高通量測(cè)序技術(shù)，對(duì)這些基因組進(jìn)行高深度測(cè)序，然后進(jìn)行基因組組裝，獲得基因組的框架圖或者精細(xì)圖甚至是完成圖。從而可以快速解析其基因組結(jié)構(gòu)、基因功能、進(jìn)化關(guān)系。無(wú)參轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序高通量

生工生物工程（上海）股份有限公司總部位于香閔路698號(hào)，是一家研發(fā)、生產(chǎn)化學(xué)試劑、生化試劑、生物試劑、耗材、小型儀器及生物工程相關(guān)產(chǎn)品(以上經(jīng)營(yíng)涉及位險(xiǎn)化學(xué)品的只有分裝業(yè)務(wù))，銷售公司自產(chǎn)產(chǎn)品并提供售后技術(shù)服務(wù);從事上述產(chǎn)品的同類商品(危險(xiǎn)化學(xué)品限許可證規(guī)定范圍)的進(jìn)出口、批發(fā)、傭金代理(拍實(shí)除外)及相關(guān)配套服務(wù);提供生物工程技術(shù)服務(wù)、技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢。:提供倉(cāng)儲(chǔ)業(yè)務(wù)。 【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目。經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)】的公司。公司自創(chuàng)立以來(lái)，投身于生化試劑，實(shí)驗(yàn)耗材，實(shí)驗(yàn)試劑，研發(fā)，是醫(yī)藥健康的主力軍。生工生物不斷開拓創(chuàng)新，追求出色，以技術(shù)為先導(dǎo)，以產(chǎn)品為平臺(tái)，以應(yīng)用為重點(diǎn)，以服務(wù)為保證，不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值，提供更優(yōu)服務(wù)。生工生物始終關(guān)注醫(yī)藥健康行業(yè)。滿足市場(chǎng)需求，提高產(chǎn)品價(jià)值，是我們前行的力量。