2021年11月1日，在這個平凡而又特殊的日子里，生工生物高通量測序部迎來了一位新成員——10xGenomics Chromium X！不要看我們個頭小，我們可是百萬級單細胞捕獲神器吆。X是如何實現(xiàn)單次運行有這么高的吞吐量呢？多通道+高捕獲+10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)。X儀器本身有16個通道（Controller為8通道），每個通道比較多捕獲20000個細胞（Controller為10000個細胞）。再結(jié)合10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)，每個通道比較多可捕獲60,000個細胞，去除雙細胞率后，每張芯片比較多可捕獲750,000個單細胞。KBSeq全質(zhì)粒測序只能測菌液和質(zhì)粒，像PCR產(chǎn)物什么的還是送一代測序吧。上海SNP高通量測序服務(wù)
擴增子測序，項目介紹：隨著基因編輯技術(shù)（尤其是CRISPR-cas9技術(shù)）的發(fā)展，科研人員使用傳統(tǒng)的Sanger測序技術(shù)無法快速有效鑒定基因編輯效率。但是，通過對靶基因區(qū)域附近設(shè)計引物，進行PCR擴增，并對PCR產(chǎn)物進行高通量測序，可以快速高效的獲得目標區(qū)域的突變頻率信息，尤其是對低頻突變的檢測效果遠遠優(yōu)于一代測序，性價比極高。16S全長分類測序，項目介紹：16S全長測序分析主要是對 16S rRNA基因全長進行擴增，基于PacBio 測序平臺測序. 相比較二代測序只選擇 1-2 個高變區(qū)進行測序，三代可以獲得全長的 16S 序列，更多變異區(qū)信息可以提高物種鑒定的分辨率，還可以提高對于群落組成的鑒定的精度。另外，針對fungus/真核生物，也可以采用類似的辦法，擴增ITS/18S全長，進行物種分類測序，提高鑒定精度。上海市無參轉(zhuǎn)錄組高通量測序應(yīng)用X儀器本身有16個通道（Controller為8通道），每個通道極限多捕獲20000個細胞（Controller為10000個細胞） 。
懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運作的呢？單細胞懸液質(zhì)控要求：?細胞濃度：700-1200cells/μl；?細胞活率>80%（當細胞懸液活率低于70%時建議進行去除死細胞處理）；細胞團及碎片雜質(zhì)<5%（無細胞粘連，無明顯的細胞碎片和細胞團，并保證細胞的完整性）；?細胞狀態(tài)：細胞直徑在7-40um之間（細胞直徑過大則建議進行抽核處理）；?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細胞的核酸分子。
對于細胞樣品，送樣量需達到 5 × 106（5乘10的6次方）數(shù)量級。富集后置于 2 ml Ep管中，用 1 ml TRIzol 重懸，注意取樣后立即用液氮或干冰乙醇速凍，保存于-80°C 冰箱，埋于足量的干冰中用保溫箱寄送。強烈建議細胞樣品先做細胞鑒定及支原體/衣原體污染之后，再送出來。對于血液樣本，只接收未凍存過的抗凝血新鮮樣本?？鼓齽┎豢墒褂酶嗡剽c，可用EDTA或ACD抗凝劑，取血后以冰袋保存，切記不能使血液凍結(jié)，從取血之時開始計算，須在48小時之內(nèi)送達生工上海總部高通量測序部。如果不能提供新鮮樣本，則請?zhí)峁难褐刑崛〉目俁NA樣本。備樣要求詳見B、RNA 樣品。什么是KBSeq全質(zhì)粒測序？
AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一種小分子染料，可以通過完整的細胞膜，嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核，呈現(xiàn)綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過不完整的細胞膜，即死細胞的細胞膜，嵌入所有死細胞的細胞核，呈現(xiàn)紅色熒光，通過標記出的綠色熒光和紅色熒光就可以辨別出活細胞和死細胞，這種特異性染色的方法也可以排除無核細胞、雜質(zhì)、碎片等的干擾。熒光細胞計數(shù)儀檢測結(jié)果可以讓我們直觀的看到：細胞濃度（總細胞，活細胞，死細胞）、細胞存活率（臺盼藍和雙熒光AO/PI染色）、細胞平均直徑、細胞聚團率、細胞直徑分布等結(jié)果的展示。在運輸前將所有樣品管集中放于大包裝中。上海多重PCR高通量測序原理
一臺10xGenomics Chromium X儀器能夠在單次運行中分析數(shù)百至數(shù)十萬個細胞，讓百萬級的細胞研究變得常規(guī)。上海SNP高通量測序服務(wù)
16s/18s/ITS微生物分類測序，項目介紹：環(huán)境微生物是自然界中分布建議廣、種類建議多、數(shù)量比較大的生物類群，其群落結(jié)構(gòu)及多樣性和微生物的功能及代謝機理是微生物生態(tài)學(xué)的研究熱點，對于我們研究微生物與環(huán)境的關(guān)系、環(huán)境治理和微生物資源的利用以及人類醫(yī)療健康有著重要的理論和現(xiàn)實意義。隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展以及大量序列數(shù)據(jù)的積累，通用引物擴增結(jié)合高通量測序技術(shù)，可以快速檢索環(huán)境內(nèi)微生物的群落結(jié)構(gòu)。這項運用我們稱之為微生物分類測序。如Illumina公司的MiSeq高通量測序平臺不僅可實現(xiàn)對多樣品的多個可變區(qū)同時測序，而且在測序速度和測序通量上都有進一步提升，目前此平臺已在微生物多樣性群落結(jié)構(gòu)研究方面受到了廣大學(xué)者的認可。上海SNP高通量測序服務(wù)
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